乳乐颗粒提取工艺、主要药效学及急性毒性研究

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1、学院代号10716学号010051540189专业代码100800密级陕西中医学院ShaanxiUniversityofChineseMedicine硕士学位论文乳乐颗粒提取工艺、及主要药效学及急性毒性研究组组织病理学学位申请人樊银华专业名称中药学申请学位类型医学硕士学位指导教师姓名张恩户论文提交日期2013年4月陕西中医学院学位论文独创性声明及使用授权声明学位论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是个人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果，无抄袭及编造行为。除文中已经特别加以注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究

2、做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果并由本人所承担的法律责任。学位论文作者签名＿＿＿＿＿日期：年月日关于学位论文使用授权的声明陕西中医学院有权保留使用本人学位论文，同意学院按规定向国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版，允许被查阅和借阅。本人授权陕西中医学院可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。可以公布（包括刊登）论文的全部或部分内容。（保密论文在解密后应遵守此规定）论文作者签名＿＿＿＿＿日期：年月日论文导师签名＿＿＿＿＿日期：年月日摘要目的：优化乳乐颗

3、粒的提取工艺参数，评价乳乐颗粒治疗乳腺增生病的主要药效学基础和急性毒性。方法：乳乐颗粒由柴胡、白芍、当归、莪术、海藻、香附、延胡索、青皮组成，具有疏肝理气，软坚散结，活血化瘀等功效，用于乳腺增生病。根据各药的化学成分及药理研究结果，确定提取工艺路线。采用水蒸气蒸馏法提取当归、柴胡、莪术、香附、青皮挥发油，以挥发油提取量为指标优化浸泡时间、加水量和蒸馏时间等参数；采用醇提法提取白芍、延胡索，以出膏率和芍药苷含量为指标，优化提取次数、提取时间、乙醇用量、乙醇浓度等参数；采用水煎煮法提取海藻和上述挥发油提取后的药渣，以出膏率及橙皮苷含量为指标，优化加水量、提取时间、提取次数等参数，其

4、中醇提法43按L9（3）正交表设计并统计处理而水提法按L9（3）正交表设计并统计处理。按优化后的提取工艺制备乳乐颗粒及乳乐颗粒浸膏，进行其治疗乳腺增生病的主要药效学和急性毒性试验。SD大鼠肌肉注射苯甲酸雌二醇联合少量黄体酮复制大鼠乳腺增生模型，以病理学检查可见乳腺小叶、腺泡广泛增生，小叶分布于肌肉、皮下作为模型成功标准，将成模动物随机分为乳乐颗粒组（2.7g生药/kg、5.4g生药/kg、10.8g生药/kg）、乳康软胶囊组（0.25g内容物/kg）和模型组。各组连续灌胃给药30天。末次给药后1小时，麻醉，测量大鼠第二对乳头的直径，处死动物，摘取乳腺，常规固定、包埋、切片，HE

5、染色进行乳腺组织病理学检查，免疫组化法测定乳腺组织增殖细胞核抗原（PCNA）的表达。采用小鼠醋酸扭体法，观察乳乐颗粒的镇痛作用，记录15min内的扭体反应次数。采用小鼠棉球肉芽肿法，观察乳乐颗粒对肉芽组织增生的影响。按照急性毒性试验的设计原理，测定乳乐颗粒浸膏灌胃给药对ICR种小鼠的LD50，观察急性毒性反应症状，进行心、肝、脾、肺、肾、胃等主要脏器的组织病理学检查。结果：①乳乐颗粒的提取工艺中，水蒸气蒸馏提取当归、柴胡、莪术、香附、青皮挥发油的最佳工艺为：加10倍量的水，浸泡1h，蒸馏时间为2h，提取1次。②乙醇提取白芍、延胡索的最佳工艺为：加7倍量的50%乙醇，提取3次，每

6、次2h。③用水煎煮法对海藻与挥发油提取后的药渣进行提取，最佳工艺为：加8倍量水，微沸煎提3次，每次1h。④乳乐颗粒2.7g生药/kg、5.4g生药/kg、10.8g生药/kg能明显改善苯甲酸雌二醇联合少量黄体酮致乳腺增生大鼠乳腺组织增生，降低组织病理学评分（p<0.01），抑制乳腺增生大鼠的乳头直径增生（p<0.01）。乳乐颗粒能降低PCNA表达，10.8g生药/kg组与模型组比较，差异有显著性意义（p<0.01）。⑤乳乐颗粒22.96g生药/kg、11.48g生药/kg和5.74g生药/kg能不同程度地减少0.6%冰醋酸致小鼠的扭体反应次数（p<0.01、p<0.05），抑制

7、率分别为63%、27%、12%。⑥乳乐颗粒对棉球所致的肉芽肿有抑制作用，与模型组比较，乳乐颗粒大、中剂量组（22.96g生药/kg、11.48g生药/kg）差异有显著性意义（p<0.01）。⑦乳乐颗粒浸膏小鼠连续两次灌胃给药的LD50为308.51g生药/kg，是临床人用剂量的190倍，95%可信限为288.30～330.14g生药/kg。在此剂量下的急性毒性反应表现为：少动、大便不成形、部分动物肌肉松弛、呼吸急促。死亡动物主要脏器病理学检查结果可见，1/5动物心脏心肌间质充血，肺充血、水肿