刺参肠道菌群结构对环境变化响应及其与疾病发生相关性

《刺参肠道菌群结构对环境变化响应及其与疾病发生相关性》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、谨以此论文献给爱我的和我爱的人们。⋯⋯⋯⋯⋯．荣小军独创声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含未获得(注：如没有其他需要特别声明的，本栏可空)或其他教育机构的学位或证书使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，有

2、权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权学校可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：导师签字：签字日期：年月日签字日期：年月日剌参(Apositchopusjaponicus)肠道菌群结构对环境变化的响应及其与疾病发生的相关性摘要水生生物

3、肠道内的菌群结构受周围水环境中微生物的影响较大，容易随温度、盐度、病原菌种类和丰度等外界环境条件的变化而发生改变，这种改变与疾病发生密切相关，会引起宿主自身对外界刺激做出相应的反应，影响生物体的健康状态。因此，解析外界环境因子诱导下水生生物肠道菌群群落结构和变化规律，对于了解微生物与宿主之间的相互作用关系，深入认识肠道菌群的功能，评价生物体的健康状态，预防疾病发生，开发微生态制剂，开展健康养殖等方面都具有重要意义。本文以我国目前重要的海水养殖生物一刺参为研究对象，采用PCR．DGGE指纹图谱分析技术和454焦

4、磷酸测序技术，解析了刺参肠道菌群对重要环境因素变化的响应机制与疾病发生的相关性，评估了理化因子改变和外源性病原丰度变化对海参肠道菌群及生理的影响，以期为海参肠道益生菌的筛选和疾病防控提供理论依据和技术支持。主要研究结果分述如下：1．从温度变化入手，采用PCR—DGGE方法分析了低温胁迫条件下海参肠道菌群的多样性。发现0℃以下实验组刺参肠道菌群的多样性显著低于0℃以上组。2"C和4。C束tJ参肠道中大量存在的Mycobacteriumabscessus、Stenotrophomonasmaltophilia、B

5、urkholderiasp．等在低于0"C的刺参肠道中未检测到对应条带，而Bacilluscereus、Burkholderiafungorum、De所iatsuruhatensis和3种不可培养细菌(unculturedbactenum)H‘‘匕够检测到条带，但其丰度随温度降低而降低。Janibacteranopheles、Janibactersp．、Chryseobacteriumhominis能耐受低温的影响，在实验组刺参肠道中的丰度变化不显著。根据刺参低温胁迫后的生理状态结合组织学分析发现，O'C可能

6、是刺参可以耐受的临界低温，低于O*C，海参体壁组织结构损伤较严重，表皮层细胞大部分坏死，大量细胞解体出现组织缺损和空洞，肠道内粘膜结构损伤，呼吸树组织的大量细胞崩解。结果表明，刺参在冬季低温期养殖过程中要采取有效保温方法，避免水温长期低于O℃以下造成海参冻伤死亡。2．选取刺参病原菌一副溶血弧菌(Vibrioparahaemolyticus)作为外源病原菌株进行浸浴感染，用PCR．DGGE方法分析了不同致病菌株浓度下刺参肠道菌群的变化。结果表明，105CFU／mL～109CFU／mL感染组刺参肠道组条带亮度及条

7、带数目与对照组相比均有差异，高剂量感染组的菌群多样性显著低于对照组。但未从感染发病刺参肠道优势条带中检测到矿parahaemolyticus。推测该菌引起肠道感染的主要途径是影响了肠道菌群的多样性平衡，也证实副溶血弧菌引起的海参疾病可从调节其肠道中的微生态平衡入手进行防控。3．通过正交实验研究了多因素(温度、盐度和外源病原菌的浓度)变化对刺参肠道菌群及生理的影响。结果表明：刺参肠道中存在Streptococcussp．、Pseudomonasplecoglossicida、Brevibacteriumsp．、

8、Pantoeaagglomerans和3种不可培养细菌(Unculturedbacterium)等受环境因素影响较小的菌株；高温和低盐对刺参的刺激强度大于副溶血弧菌的感染，容易引起刺参的排脏和死亡，利用SPSS软件对多因素正交试验结果分析显示，温度对刺参肠道菌群DGGE指纹图谱条带多样性影响最显著，病原菌浓度变化对刺参肠道菌群影响不显著，证实了环境因子在导致海参疾病发生中的重要作用。4．采用Roch