敌百虫在鲫体内残留规律及其细胞毒性的初步研究

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1、上海海洋大学硕士学位论文学校代码：10264研究生学号：M150104137上海海洋大学硕士学位论文敌百虫在鲫体内残留规律及其细胞毒性的初步题目：研究PreliminaryResearchonResiduesRegularity英文题目：andCytotoxicityofTrichlorfononCruciancarp专业：临床兽医学研究方向：水产动物病害学姓名：张敏利指导教师：吕利群二O一八年四月五日上海海洋大学硕士学位论文1上海海洋大学硕士学位论文上海海洋大学硕士学位论文答辩委员会成员名单姓名工作单位职称备注刘万红武汉大学教授黄赞武汉大学教授徐鸿绪中山大学教

2、授张俊彬深圳大学教授姜有声上海海洋大学副教授答辩地点生命学院D楼答辩日期2018.05.192上海海洋大学硕士学位论文摘要敌百虫是一种有机磷化合物，常作为杀虫剂，具有低毒和低残留的特点。敌百虫在中性及弱酸性溶液中较稳定，在碱性溶液中易形成毒性更大的敌敌畏。高浓度敌百虫影响水生生物的生长和繁殖，通过食物链进入人体，危害人体健康。不仅影响生物体的生长、发育和生殖，还在细胞和分子水平导致氧化应激、促使自由基的产生，影响相关基因的表达，甚至引起细胞死亡。（1）研究不同给药方式对敌百虫在鲫肌肉中残留规律，本文首先比较了高效液相色谱仪、气质联用仪和液质联用仪三种检测方法，结

3、果显示液质联用仪方法灵敏度最高（0.2ng/g），因此选择液质联用仪检测鲫肌肉中敌百虫。在20±2℃条件下，将鲫分别浸泡于敌百虫浓度为0、0.2mg/L和0.5mg/L的水溶液中，结果显示鲫肌肉的药时曲线符合一吸收一室模型，药物达峰时间分别是5.74d和5.650d，达到峰浓度0.163μg/g和0.502μg/g，根据鲫肌肉中敌百虫的药动学方程，药残达到国家限量标准所需时间约为5d；分别以0.5g/kg、1g/kg和2g/kg的剂量给鲫口灌敌百虫，结果显示鲫肌肉的药时曲线符合一吸收一室模型，药物达峰时间分别为5.188h、5.038h和5.997h，达到峰浓度

4、分别为0.199μg/g、0.261μg/g和0.422μg/g，根据鲫肌肉中敌百虫的药动学方程，药残达到国家限量标准所需时间约为4d。（2）一些成功的研究报告与敌百虫水浴治疗控制水产养殖的寄生虫。但大规模使用敌百虫造成了日益严重的环境污染。本研究是探讨口服后鲫体内代谢规律，相关酶和肝脏毒性。在这项研究中，不同浓度的敌百虫(0.5g/kg，1g/kg和2g/kg)对鲫口服用药，药物浓度在血浆和肝脏组织在不同时间点变化。口腔接触之初，敌百虫在血浆和肝脏组织的吸收快，随后敌百虫迅速降解，24小时内达到最低水平。此外，SOD、CAT和GSH-ST活性发生比较明显的变化

5、，肝脏组织也有不同形态变化。通过HE染色，发现在肝脏中出现空泡变性和坏死的现象。（3）敌百虫是草鱼养殖过程中治疗寄生虫感染的常用药。为研究敌百虫对草鱼的毒性机理，本实验探讨了敌百虫对草鱼肝脏细胞的毒性效应。我们发现，敌百虫处理草鱼肝脏细胞能引起细胞的凋亡。使用不同浓度敌百虫处理草鱼肝脏细胞后，检测细胞的活性、细胞凋亡率、caspase-3/7的酶活性以及凋亡相关基因caspase-3和caspase-9表达变化。结果显示：与对照组相比，不同浓度（10μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、500μg/mL和1000μg/mL）敌百虫处理细胞24h后，可以3

6、上海海洋大学硕士学位论文引起细胞活性下降，在敌百虫浓度为1000μg/mL最低，低至46.9%。同时，细胞凋亡率上升，在敌百虫浓度为1000μg/mL时凋亡率最高，高至32.3%。随着敌百虫浓度增加，caspase-3/7的活性上升，凋亡相关基因显著性上升。敌百虫浓度为500μg/mL时，细胞出现变形和破裂，形成凋亡小体，并出现明显TUNEL阳性信号。加入三种不同抑制剂（Vc、ALC和Z-VAD-FMK）后，发现不同浓度的caspase抑制剂Z-VAD-FMK对细胞的影响较大，随着抑制剂浓度增加，草鱼肝脏细胞活性增强、凋亡率降低、凋亡相关基因的表达出现下调和ca

7、spase-3/7的活性上升。本研究用不同检测方法检测敌百虫，比较了浸泡和口灌敌百虫在鲫肌肉残留规律，制定休药期。口灌后对体内代谢、相关酶和肝脏毒性的变化，表明高浓度的敌百虫溶液降低机体免疫力，对机体易产生损伤。敌百虫可以诱导的草鱼肝脏细胞的凋亡是通过死亡受体途径介导的。敌百虫处理细胞后通过改变caspase-3和caspase-9表达最终导致细胞调亡。关键词：敌百虫，鲫，浸泡，口灌，残留规律，酶，肝脏毒性，细胞凋亡4上海海洋大学硕士学位论文AbstractTrichlorfonisaorganophosphoruscompoundthatisoftenused

8、asaninsectic