副溶血弧菌的环境因子响应及其快速检测技术

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2、谨学风。所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经明确注明和引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律后果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日上海海洋大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权上海海洋大学可以将本学位论文的全部

3、或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本版权书。本学位论文属于不保密□学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日上海海洋大学硕士学位论文上海海洋大学硕士学位论文答辩委员会成员名单姓名工作单位职称是否硕导备注温海深中国海洋大学教授是主席李成林山东省海洋生物研究院研究员是委员宋志文青岛理工大学教授是委员中国水产科学研究院黄海水柳学周研究员是委员产研究所中国水产科学研究院黄海水曲克明研究员是委员产研究所中国水产科学

4、研究院黄海水李秋芬研究员是委员产研究所中国水产科学研究院黄海水丁东生助理研究员否秘书产研究所答辩答辩地点：中国水产科学研究院2018年5月22日日期黄海水产研究所4号楼4楼会议室上海海洋大学硕士学位论文副溶血弧菌的环境因子响应及其快速检测技术EffectofenvironmentalfactorsonthegrowthandrapiddetectionmethodofVibrioparahaemolyticus学位论文完成日期：指导教师签字：答辩委员会成员签字：上海海洋大学硕士学位论文副溶血弧菌

5、的环境因子响应及其快速检测技术摘要副溶血弧菌（Vibrioparahaemolyticus，VP）是具有嗜盐性的致病菌、属革兰氏阴性，在海洋等水体环境中普遍存在。致病性VP不但可以感染多种动物，还可以导致食用者出现典型胃肠炎症状等临床反应。近年来，由VP引发的食物中毒事件数量呈猛烈的上升趋势，因此，该菌的扩散不但可以造成生态环境灾难，还严重威胁着人类的健康。无论是从科学调查角度还是从保障食品安全等生产与生活需求来讲，对影响该病原菌生长的环境因子作用机理及其有效检测方法进行研究都具有重要的现实意义

6、。二十一世纪以来，科学工作者对VP与其所赖以生存的诸环境因子（比如温度、盐度、pH等）之间的关系已经进行了多方位的研究，但方法多基于单因子效应分析，数据间关联性较差，不能充分反应出交互作用。因此，具有较高吻合性的综合性分析预评估的手段有待建立。截至目前，分析检测VP的多种方法，诸如传统的培养法、免疫法和PCR法，以及具有更高特异性和效率的环介导等温扩增法（LAMP）等，都已经得到广泛研究，但主要应用于水产品中该菌的评估，而对环境中VP的检测鲜有报道。鉴于水产品中的VP与其生长环境密切相关，对海洋

7、、河口等水环境中该菌的监测可为水产养殖及其它多种渔业活动提供有效预警数据，进而从源头上减少被感染海产品对人们身体康健带来的威胁。因此，开发海水中该菌的准确、高效检测方法具有重要现实意义，但迄今为止，尚未见有相关报道。本论文分为三个主要部分。第一部分是文献综述，讲述研究背景、目标与意义。第二部分论述采用响应面法研究温度、盐度、pH、硝氮、氨氮和磷对VP的生长影响，以探索、评估这六种物理理化学因子的综合作用结果。通过首先用Design-Expert软件中的BoxBehnken中心组合原则设计三因素三

8、水平响应面测验，再进行响应面分析，以培养基光密度（OD600）值为生长状态参数，获得该菌在温度、盐度和pH三影响因子下的最佳培养参数。在此基础上，考察硝酸盐、铵盐和磷酸盐对VP生长的影响并建立模型，得到回归方程。该方程决定系数R2=0.9217，校正系数R2=0.8211，回归模型F=9.16,P=0.004，表明该模型具有较好的准确性。实I上海海洋大学硕士学位论文验所得实测值与模型演算理论值拟合良好，皆表明硝氮、氨氮和磷对VP的生长都具有抑制作用。第三部分论述海水中VP的可视化快速检测方法的构