大鼠局灶性皮质发育不良iiid模型可行性的研究及缝隙连接蛋白43表达分析

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1、目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3研究论文前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯67日IJ舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯14附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯22讨论⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯24结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3l参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯32综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯37致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯47个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯48中文摘要大鼠局灶性皮质发育不良IIId模型可行性研究及缝隙连接蛋白43表达分析摘要背景：癫痫是神经系统疾病中仅次于脑血管病以外的第二大疾病，共约有25％的药物难治性

3、癫痫需手术治疗，经手术治疗的患者中约有75％的儿童癫痫和约25％的成人癫痫由局灶性皮质发育不良(Focalcorticaldysplasia，FCD)所引起。FCD被认为是大脑皮层形成过程中，神经元的增殖、移行、皮层组建等正常程序受到干扰所致。2011年国际抗癫痫联盟对FCD做出最新分类，认为生后早期任何后天获得性损害，包括外伤、炎症及缺血性损害等均可造成FCD，并称其为FCDIIId型。缝隙连接(GapJunction，GJ)是由相邻两个细胞的细胞膜上相互对应的半通道组成，相邻细胞胞浆由中间连接小体对接而连通，目前认为是相邻细胞间唯一z月,匕

4、I-．进行物质和信息直接交换的通道，该通道是非选择性的离子通道，仅可以允许直径小于1．5纳米或者分子量小于1200道尔顿的小分子物质和电流在其间通过，能促进细胞间的电化学偶联和细胞间的新陈代谢。缝隙连接蛋白(Connexin，CX)是由多基因家族编码的一大类膜蛋白，CX在哺乳动物种间具有高度的保守性，大鼠CX氨基酸序列与人类具有高度同源性，382个氨基酸中仅有9个不同，同源性高达97％。至今在人类及哺乳动物中共发现15种，脑内CX43分布最为广泛。惊厥是大量神经元超同步化放电所致，是细胞内环境稳态被破坏的表现，或者是细胞兴奋或抑制失衡所致。神经

5、元之间的离子产生的电活动在惊厥中起着不可忽视的作用，缝隙连接蛋白被认为是神经元间的电突触的结构学基础。故此，通过缝隙连接蛋白促使相邻细胞形成同步化活动，造成放电的异常播散，有可能是形成癫痫的结构学基础。目前对FCD发病机制的认识还很肤浅，关于FCD的国内外临床研究较多，多集中在对于手术切除标本的回顾性研究，但较缺乏相应的基础实验研究，FCD的形成机制和致痫机制尚不明了，缺乏稳定的可靠的动物模型。正确建立FCD动物模型对人类疾病病因病机分析，诊断方法探索，针对性的治疗及预后判断有着不可估量的意义。中文摘要故此，本实验拟采用液氮冷冻方法探讨制作FC

6、DIIId动物模型的可行性，并对CX43的表达进行分析。目的：应用液氮冷冻方法建立FCDIIId的癫痫大鼠模型并验证，分析CX43在模型中的表达，从而为进一步探讨人类FCD发生机制及未来治疗提供理论及实验依据。方法：取孕鼠产后第一天乳鼠为实验对象，液氮冷冻新生乳鼠大脑皮层，随机分为实验组和对照组，实验组依据冷冻时间不同分为30秒实验组、60秒实验组和90秒实验组三个亚组。自造模后21天到第8周为实验时间，期间观察实验动物意识状态、行为学，实验第8周监测发作间期脑电图，实验动物满8周时行头颅核磁共振检查，行HE染色及免疫组织化学染色，观察细胞的形

7、态及CX43的表达，最终实验数据以SPSSl3．0统计学软件分析。结果：各实验组不同程度存在精神萎靡，活动减少，不思饮食等表现。行为学中自发性癫痫仅观察到5次，表现为湿狗样颤动，面肌抽动，咀嚼动作增多；节律性点头，洗脸样动作增多；最严重表现为前肢阵挛。实验组脑电图癫痫样放电率平均约为41．6％，各实验组间比较无统计学差异。实验组MRI阳性结果表现为造模部位长T1长T2信号。实验组脑组织切片HE染色见存在层状结构和存在柱状结构紊乱，存在形态异常神经元和气球细胞，FCDIIId阳性率平均约为75％，60秒、90秒实验组较30秒实验组阳性率明显增高P

8、<0．05，但60秒实验组与90秒实验组比较无统计学差异。CX43每视野阳性细胞数(以均数4-标准差表达)：对照组19．90-J：3．221，30秒实