adar1在食管鳞状细胞癌中的表达及其功能的初步研究

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1、AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterCharacterizationoftheadenosinedeaminaseactingonRNA一1inEsophagealsquamouscellcarcinomaByJunjingQiaoSupervisor：Prof．YanruQinclinicalmedicineSpecialitV：oncologVl■一rTheFirstAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversityM

2、ay2013学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：看侣籀日期：妒似年；月J。同学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅

3、和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：香1谫日期：驴B年弓月／o同中文摘要ADARl在食管鳞状细胞癌中的表达及其功能的初步研究硕士研究生：乔俊静导师：秦艳茹教授郑州大学第一附属医院郑州450052研究背景和目的食管癌是全世界最具侵袭性的恶性肿瘤之一，并且被认为是癌症所导致的死亡原因的第六位。

4、鳞状细胞癌是食管癌的主要病理类型，它的发生有显著的地域性差异，特别是在我国的华北地区发病率极高。流行病学研究结果显示，食管癌的病因可能包括：吸烟、微量元素的缺乏和人类乳头瘤病毒等。然而，在食管癌的高发区，如河南．林县，这些危险因素的致病性却很小。有研究表明，在中国的华北地区，食管癌的发生具有明显的家族聚集现象，基因易感性在食管癌的发生发展过程中发挥重要的作用。在过去的几十年，尽管在技术诊断和放化疗方面取得了极大进步，但患者的预后仍然很差。和其他实体瘤类似，食管癌变也是一个多阶段、多种因素相互作用的发展过程，其中癌基因的激活和抑

5、癌基因的失活发挥重要的作用。到目前为止，食管癌发生的分子机制，如细胞的增殖失调机制等尚不清楚。因此，为了提高食管癌的早期诊断率和治疗效果，系统的研究食管癌的发生发展机制就显得非常有必要。为了研究与食管癌发生机制密切相关的作用因子，我们在河南省林州市收集了从2001年到2004年手术切除的食管癌组织及其癌旁相对正常的组织的石蜡包埋组织样本180例，建立了一套包含临床病理资料及预后情况的组织芯片。另外，我们从河南省食管癌高发地——林州市收集了新鲜食管癌标本及其癌旁相对正常的组织89例，同时提取了组织的DNA和RNA。随后应用Q—P

6、CR技术检测食管癌组织及其癌旁相对正常组织的ADARl表达情况，发现ADARl在食管癌组织中的表达明显高于其在癌旁相对正常组织中的表达。中文摘要研究方法1临床标本的收集我们在河南省林州市人民医院收集了89例手术切除的食管癌组织及其癌旁相对正常的组织，所有的样本都经过常规的甲醛固定、石蜡包埋、切片和HE染色，病理诊断为食管鳞状细胞癌，正常组织中无肿瘤细胞。所有患者术前均无放化疗及免疫治疗史．2方法应用Q．PCR方法检测ADARlmRNA在89例食管癌及其癌旁相对正常组织中的表达差异；同时应用免疫组织化学方法检测ADARl蛋白在食

7、管癌组织芯片中的表达差异。为了探讨ADARl在食管癌细胞中的作用，我们将ADARl通过脂质体转染入ADARl低表达的ECl09、KYSEl80两株食管癌细胞系中，用blasticidin筛选出稳定表达ADARl的细胞克隆，通过Q．PCR及Westernblot验证其表达情况。同时，我们将siADARl通过脂质体转染入ADARl高表达的KYSE510食管癌细胞株，用puromycin筛选出稳定表达SiADARl的细胞克隆，通过Q—PCR及Westernblot验证其表达情况。通过细胞增殖实验、平板克隆形成实验、软琼脂克隆形成实验

8、以及细胞侵袭和迁移实验对ADARl的功能进行研究。同时，应用流式细胞术检测siADARl在肿瘤细胞周期中所发挥的作用。研究结果mRNA和蛋白的表达情况均表明ADARl在食管癌组织中明显高表达。与此同时发现ADARl的表达和患者术后的预后密切相关。细胞增殖实验、平板克隆形成实验