肝螺杆菌感染balbc小鼠实验模型的建立及其干扰免疫应答的初步研究

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1、肝螺杆菌感染BALB／c小鼠实验模型的建立及其干扰免疫应答的初步研究EstablismentofthemodelsofBALB／cmiceinfectedwithHelicobacterhepaficusandtheprefiminaryeffectsonimmuneresponses研究生：朱剑波专业：动物学导师：薛整风研究员扬州大学兽医学院比较医学中心2011年6月朱剑波：肝螺杆菌感染BALB／c小鼠实验模型的建立及其干扰免疫应答的初步研究肝螺杆菌感染BALB／c小鼠实验模型的建立及其干扰免疫应答的初步研究中文摘要中

2、文搁要肝螺杆菌(H．hepaticus)是革兰氏阴性、螺杆状、微需氧、尿素酶阳性、有动力的螺杆菌属细菌，由FOX等在1994年首次分离获得。大量实验证明，H．hepaticus是某些品系小鼠慢性肝炎、肝硬化、肝癌及炎症性肠病的病原因子之一。1-1．hepaticus在啮齿类动物中常呈隐性感染．机体免疫正常的动物不表现临床症状，但在多种实验动物中表现出较高的感染率。本研究建立了BALB／c小鼠肝螺杆菌感染的实验模型，初步研究了肝螺杆菌的致病特点及其对小鼠机体免疫应答的干扰。首先，复苏H．hepaticus标准菌株ATCC5

3、1450，并通过形态学鉴定、生化反应和PCR扩增证实了所复苏的细菌为H．hepaticus。选取已证实无H．hepaticus感染的SPF级BALB／c雄性小鼠200只，将这些小鼠分成实验组和对照组，每组各100只。对实验组小鼠每隔48h连续3次口服灌饲H．hepaticus菌液O．2mL，对照组小鼠以相同的方法灌饲等量PBS。观察两组小鼠的生长状态和表型交化。于末次接种H．hepaticus后第2、3、4、5个月时收集小鼠粪便，提取粪便DNA，进行H．hepaticus16SrRNA特异性基因扩增，检测小鼠H．hepa

4、ticus的感染率。结果表明，实验组小鼠H．hepaticus的感染率随着接种时间的延长而增加，接种2个月后，感染率接近100％，获得了稳定的BALB／c小鼠肝螺杆菌感染实验模型。同时于末次接种It．hepaticus后第2、3、4、5个月，每组处死15只小鼠，分别取小鼠肝脏、胃、盲肠和结肠，进行H．hepaticus16SrRNA特异性基因扩增和病理组织学检查。结果显示，所检组织中均检测到了H．hepaticus，且随着时间的延长，检出率逐渐增加，可见H．hepaticus可以在肝脏、胃、盲肠、结肠这些组织中定植。病理

5、检查结果表明，H．hepaticus感染组小鼠肝脏组织中央静脉周围肝细胞发生脂肪变性、肝小叶局灶性坏死、坏死灶周围有不同程度的炎性细胞浸润等病理变化，随着时间的延长，病变严重程度增加：胃和盲肠病变不显著，少量实验组小鼠胃粘膜下层有少量炎性细胞浸润、胃粘膜上皮坏死脱落；盲肠表现不同程度的炎性细胞浸润。分别选取8只由本研究第一部分获得的感染H．hepaticus5个月的BALB／c小鼠和未感染H．hepaticus的BALB／c小鼠作为实验组和对照组，体外分离培养小鼠骨髓树突状细胞，扬州大学硕士学位论文II用粒细胞一单核细胞

6、集落刺激因子(GM—CSF)、白细胞介素．4(IL．4)，刺激DC增值、分化，用流式细胞仪分析DC细胞表面分子CDIic、CD40、CD80、MHCII的表达率。结果表明，MHCII和CD40分子在实验组的表达率要高于对照组的表达率。在此基础上，我们又分别选取了15只由本研究第一部分获得的感染H．hepaticus5个月的BALB／c小鼠和未感染H．hepaticus的BALB／c小鼠，用新城疫病毒(NDV)ZJl株进行免疫，每只小鼠接种0．2mL病毒液，每周测定两组小鼠血清中的抗NDV抗体效价，比较两组小鼠产生抗体的差

7、异。结果显示，在不同时间段，H．hepaticus感染可以促进BALB／c小鼠产生抗NDV的抗体水平，这可能与H．hepaticus感染可刺激DC细胞表面CD40和MHCII类分子表达水平有一定的关系。通过本研究，我们建立了稳定的肝螺杆菌感染BALB／c小鼠实验模型，探讨了H．hepaticus在小鼠各脏器的定植情况及其对小鼠机体免疫应答的干扰，这些研究成果对于H．hepaticus的研究有一定的意义。关键词：肝螺杆菌；定植；组织病变：树突状细胞；新城疫病毒：抗体朱剑波：肝螺杆菌感染BALB／c小鼠实验模型的建立及其干扰

8、免疫应答的初步研究EstablismentofthemodelsofBALB／cmiceinfectedwithIIlHelicobacterhepaticusandthepreliminaryeffectsonimmuneresponsesABSTRACTHelicobacterhepaticusisagram-n