针刺对慢性萎缩性胃炎模型大鼠nf--kb转导系统影响的研究

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1、广州中医药大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是个人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经特别加以注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签日期：2．mq-年关于学位论文使用授权的声明本人完全了解广州中医药大学有关保留使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版，允许被查阅和借阅。本人授权广州中

2、医药大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。(保密论文在解密后应遵守此规定)论文作者签蛸论文导师签名日期：—羽碑年，,EJ岁D日摘要JIIIIIIIIIIIIlullIIII『Y2622754背景在针灸门诊的临床实践中，经常会遇到慢性萎缩性胃炎的患者，这部分患者通常是接受了各种治疗措施而疗效欠满意后，前来寻求针灸医生帮助的。正是这种临床常见的疾病，因其发病原因复杂，没有统一的方案可循，且各种治疗方式效果差强人意，因此成为临床常见疑难病之一。在针

3、灸临床实践中，我们发现针灸对本病的治疗具有较为理想的效果，而且诸多临床随机对照试验文献报告业已证实，针灸治疗慢性萎缩性胃炎具有较好的疗效，但其内在的机理尚不明确。因此，设计严谨的动物实验，探究针灸治疗本病的机理尤为有必要。NF．rB信号转导系统是各种炎症反应的三条重要转导通路之一，也是影响炎症反应中细胞凋亡进程的重要因素。为探究针灸治疗慢性萎缩性胃炎的分子机理，基于导师已有的研究成果及在查阅大量相关文献基础上，我们提出假设：针刺治疗慢性萎缩性胃炎的机制可能是，针刺具有NF．rJ3信号转导系统的作用，从而抑制炎症的发展

4、，减轻炎症反应，并调节抗细胞凋亡基因的表达，减轻胃黏膜细胞的凋亡，从而达到保护胃黏膜的作用。所以，本研究希望通过研究针刺穴位对慢性萎缩性胃炎大鼠NF．心信号转导通路中TLR4、IL．1RI、TAKl、ir,gp、Ir．B、NF．r,B、IL．8、IL．1R、TNFRI及TUNEL的表达，一方面观察针刺疗法对慢性萎缩性胃炎的治疗效果，另一方面探讨针刺对NF．r,B信号转导通路的影响，从而丰富针刺穴位治疗慢性萎缩性胃炎的相关理论，提高对临床的指导价值和运用价值，同时也为针刺穴位预防慢性萎缩性胃炎癌前病变提供新的研究线索。

5、目的通过建立慢性萎缩性胃炎大鼠模型，探讨NF．r．B信号转导通路中TLR4、IL．1RI、TAKl、ir,gp、Ir．B、NF—r,B、IL-8、IL-IR、TNFRI及TUlqEL在慢性萎缩性胃炎模型大鼠中的表达及意义，观察针刺对上述指标表达的影响，探讨针刺对NF．r,B转导系统的影响，为针灸治疗慢性萎缩性胃炎提供理论和实验依据。方法选用80只体重在180—2009雌雄各半的SD大鼠，用随机数字表法设立空白对照组25只，CAG造模组55只。空白对照组正常喂养。造模组采用如下造模方法进行慢性萎缩性胃炎大鼠模型的制备：

6、配置浓度为lg／L的MNNG溶液，避光低温保存；使用时用蒸馏水稀释成100倒ml，供大鼠自由饮用，同时配合饥饱失常法(即足量喂食1天，禁食1天，两者交替进行)。造模组大鼠经某次随机剖杀，经胃黏膜光镜下病理学检查确认建立成功后，则将造模组剩余大鼠采用随机数字表法分为模型组和针刺组。本研究模型成功复制后，模型组为21只大鼠，针刺组为22只(造模过程中大鼠死亡6只，随机剖杀6只)，随即开展实验。空白组大鼠，正常喂养，不施加干预措施，直至实验结束。模型组大鼠，正常喂养，不施加干预措施，直至实验结束。针刺组大鼠，正常喂养，施加

7、针刺干预措施，直至实验结束。针刺组干预措施为：30号1寸不锈钢毫针针刺足三里、中脘、脾俞三个穴位，刺至所需深度，得气后留针15min，每天治疗一次，十天为一个疗程，共治疗6个疗程。治疗完毕后，剖杀所有大鼠，进行各项观察指标检测：1．胃黏膜病理观察；2．胃黏膜损伤指数；3．ELISA检测TNF．Ⅱ、TNFRI和IL．6；4．免疫组化观察本信号通路上的IL．1RI、TAKl、TLR4、IKK、Ir,B、NF．r,B和IL．8细胞因子；5．胃黏膜细胞凋亡指数；6．胃黏膜细胞超微结构观察。成果1．第12周末随机剖杀经光镜下胃

8、黏膜病理观察证实造模成功后，进入治疗阶段，在治疗干预过程中无大鼠死亡；最终纳入研究大鼠共66只，空白组23只，模型组21只，针刺组22只。2．胃黏膜病理观察：空白组大鼠正常胃粘膜表现；模型组大鼠的胃黏膜改变符合慢性萎缩性胃炎的病理诊断标准：针刺组大鼠胃黏膜有不同程度的好转。3．模型组大鼠胃黏膜损伤指数和血清CRP、TNF．a、TNFRI、IL．