肉兔肠道菌群结构同源复合微生态制剂的研究

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1、分类号UDCa密级编号a硕士学位论文肉兔肠道菌群结构同源复合微生态制剂的研究Studyonthecompoudprobioticshomologizewiththestructureofintestinalflorainmeatrabbit学位申请人:李云飞指导教师:秦翠丽教授一级学科:生物学二级学科:微生物学学位类别:理学硕士2016年05月万方数据独创性声明本人声明,所呈交的论文是我个人在导师指导下完成的研究工作及取得的研究成果。据我所知,文中除了特别加以标注和致谢的地方外,不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得河南科技大学或其

2、它教育机构的其他学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名:日期:关于论文使用授权的说明本人完全了解河南科技大学有关保留、使用学位论文的规定,即:学校拥有对所有学位论文的复制权、传播权、汇编权及其它使用权(特殊情况需要保密的论文应提前说明,但在解密后应遵守此规定)。需要保密的论文请填写:本学位论文在年月至年月期间需要保密,解密后适用本授权书。(需要保密的学位论文无须向图书馆提供论文的电子文档)研究生签名:导师签名:日期:万方数据摘要摘要基于肠道微生物组学的原理,依照古代兽医用

3、“粪茶”治疗牲畜腹泻的思路,选取肉兔为研究对象,从其粪便中富集发酵出以益生菌为主的复合微生态制剂,饲喂幼兔并观察这种复合微生态制剂对肉兔的益生效果,并且设计了一种以ERIC-PCR基因指纹图谱为基础快速分析粪便主要菌群结构的方法。研究主要有以下几个部分:第一,借鉴Cinquin等提出的新型固定化细胞发酵模型,设计了一种适宜于肠道有益菌群生长的厌氧固定化发酵装置;为了验证装置的预期性能并筛选出适宜的培养条件,用该装置进行了肠道菌群培养试验。培养时先用凝胶小球固定粪样中的菌群,然后转入装置中进行发酵,结果表明装置的最适发酵温度与肠道相近为37℃,发酵成

4、熟时间为20h,能提供有效的厌氧环境,对以双歧杆菌为代表的肠道厌氧菌富集效果高达270倍,能够很好的模拟肠道的发酵状态。第二,为了获得最适发酵培养基,进行了一系列的碳氮源筛选试验、pH试验、单因素试验、梯度爬坡试验和响应面试验。通过在培养基中添加双歧杆菌促生长剂,对发酵培养基进行优化,得到了一种能够使最终发酵产物中双歧杆菌等益生菌的含量最高,而大肠杆菌等条件致病菌含量最低的培养基配方,为后面发酵制备复合微生态制剂做准备。第三,为了能够方便检测粪样中的菌群结构变化,设计了一种基于ERIC-PCRDNA指纹图谱技术的菌群结构检测方法。首先优化出适合兔粪

5、微生物的ERIC-PCR反应体系;然后通过选择性培养基平板分离出粪样中双歧杆菌和大肠杆菌,提取基因组作ERIC-PCR分析,确定兔粪微生物基因指纹图谱中450bp处为双歧杆菌的特征条带,1300与4000bp处为大肠杆菌特征条带,测定这3条条带的亮度信息即可分析两种菌的含量比例;最后经发酵验证,图谱中的相应条带亮度变化趋势与平板计数所测结果相一致(相对亮度R与相对菌落数lgcfu的相关系数为0.9676),证明该检测方法较为可靠。第四,为了验证所设计和制备的复合微生态制剂的益生效果,开展了初步的动物试验,结果表明饲喂了复合微生态制剂的肉兔生长性能显

6、著提高,与空白对照组相比料重比降低达17.25%,且肠道抵抗外界干扰的能力提高,患腹泻的概率明显降低。关键词:肠道菌群;复合微生态制剂;ERIC-PCR;培养基优化;肉兔论文类型:应用基础研究选题来源:其他I万方数据ABSTRACTABSTRACTBasedontheprincipleofgutmicrobiology,andinaccordancewithideasthattheveterinarytreatedanimaldiarrheawith"manuretea"inancient,themeatrabbitwaschosenforthes

7、tudy,inordertoresearchthecompoundprobioticswithprobiotic-basedfermentedfromtherabbitfeces.Thenyoungrabbitswerefedonthiscompoundprobiotics,andwereobservedthebeneficialeffect.Atthesametime,akindofrapidmethodtoanalysismainstructuresoffecalmicrobiotawasdesignedbasedonERIC-PCRgenet

8、icfingerprinting.Thisresearchmainlyhasthefollowingaspects:Fir

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1、分类号UDCa密级编号a硕士学位论文肉兔肠道菌群结构同源复合微生态制剂的研究Studyonthecompoudprobioticshomologizewiththestructureofintestinalflorainmeatrabbit学位申请人:李云飞指导教师:秦翠丽教授一级学科:生物学二级学科:微生物学学位类别:理学硕士2016年05月万方数据独创性声明本人声明,所呈交的论文是我个人在导师指导下完成的研究工作及取得的研究成果。据我所知,文中除了特别加以标注和致谢的地方外,不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得河南科技大学或其

2、它教育机构的其他学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名:日期:关于论文使用授权的说明本人完全了解河南科技大学有关保留、使用学位论文的规定,即:学校拥有对所有学位论文的复制权、传播权、汇编权及其它使用权(特殊情况需要保密的论文应提前说明,但在解密后应遵守此规定)。需要保密的论文请填写:本学位论文在年月至年月期间需要保密,解密后适用本授权书。(需要保密的学位论文无须向图书馆提供论文的电子文档)研究生签名:导师签名:日期:万方数据摘要摘要基于肠道微生物组学的原理,依照古代兽医用

3、“粪茶”治疗牲畜腹泻的思路,选取肉兔为研究对象,从其粪便中富集发酵出以益生菌为主的复合微生态制剂,饲喂幼兔并观察这种复合微生态制剂对肉兔的益生效果,并且设计了一种以ERIC-PCR基因指纹图谱为基础快速分析粪便主要菌群结构的方法。研究主要有以下几个部分:第一,借鉴Cinquin等提出的新型固定化细胞发酵模型,设计了一种适宜于肠道有益菌群生长的厌氧固定化发酵装置;为了验证装置的预期性能并筛选出适宜的培养条件,用该装置进行了肠道菌群培养试验。培养时先用凝胶小球固定粪样中的菌群,然后转入装置中进行发酵,结果表明装置的最适发酵温度与肠道相近为37℃,发酵成

4、熟时间为20h,能提供有效的厌氧环境,对以双歧杆菌为代表的肠道厌氧菌富集效果高达270倍,能够很好的模拟肠道的发酵状态。第二,为了获得最适发酵培养基,进行了一系列的碳氮源筛选试验、pH试验、单因素试验、梯度爬坡试验和响应面试验。通过在培养基中添加双歧杆菌促生长剂,对发酵培养基进行优化,得到了一种能够使最终发酵产物中双歧杆菌等益生菌的含量最高,而大肠杆菌等条件致病菌含量最低的培养基配方,为后面发酵制备复合微生态制剂做准备。第三,为了能够方便检测粪样中的菌群结构变化,设计了一种基于ERIC-PCRDNA指纹图谱技术的菌群结构检测方法。首先优化出适合兔粪

5、微生物的ERIC-PCR反应体系;然后通过选择性培养基平板分离出粪样中双歧杆菌和大肠杆菌,提取基因组作ERIC-PCR分析,确定兔粪微生物基因指纹图谱中450bp处为双歧杆菌的特征条带,1300与4000bp处为大肠杆菌特征条带,测定这3条条带的亮度信息即可分析两种菌的含量比例;最后经发酵验证,图谱中的相应条带亮度变化趋势与平板计数所测结果相一致(相对亮度R与相对菌落数lgcfu的相关系数为0.9676),证明该检测方法较为可靠。第四,为了验证所设计和制备的复合微生态制剂的益生效果,开展了初步的动物试验,结果表明饲喂了复合微生态制剂的肉兔生长性能显

6、著提高,与空白对照组相比料重比降低达17.25%,且肠道抵抗外界干扰的能力提高,患腹泻的概率明显降低。关键词:肠道菌群;复合微生态制剂;ERIC-PCR;培养基优化;肉兔论文类型:应用基础研究选题来源:其他I万方数据ABSTRACTABSTRACTBasedontheprincipleofgutmicrobiology,andinaccordancewithideasthattheveterinarytreatedanimaldiarrheawith"manuretea"inancient,themeatrabbitwaschosenforthes

7、tudy,inordertoresearchthecompoundprobioticswithprobiotic-basedfermentedfromtherabbitfeces.Thenyoungrabbitswerefedonthiscompoundprobiotics,andwereobservedthebeneficialeffect.Atthesametime,akindofrapidmethodtoanalysismainstructuresoffecalmicrobiotawasdesignedbasedonERIC-PCRgenet

8、icfingerprinting.Thisresearchmainlyhasthefollowingaspects:Fir

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