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时间:2019-03-07
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1、南方医科大学2011级硕士学位论文淀粉样前体蛋白在卵巢颗粒细胞和卵泡液中的表达以及与多囊卵巢综合征的关系Theexpressionofamyloidprecursorproteininovariangranulosacellsandfollicularfluidanditsrelationtopolycysticovarysyndrome课题来源:国家自然科学基金(81170574)2012年南方医院高层次课题匹配经费(G201206)学位申请人黎璞导师姓名陈士岭教授专业名称妇产科学培养类型学术型
2、培养层次硕士研究生所在学院第一临床医学院答辩委员会主席答辩委员会委员论文评阅人罗深秋教授梁晓燕教授李洁教授孙筱放教授张清学教授罗深秋教授梁晓燕教授2014年5月11日广州硕士学位论文淀粉样前体蛋白在卵巢颗粒细胞和卵泡液中的表达以及与多囊卵巢综合征的关系硕士研究生:黎璞指导老师:陈士岭摘要随着时代的发展,生活方式的改变,现代女性由于教育、工作等多种原因而选择延迟初次生育时间的趋势越来越明显,导致许多年龄相关性不孕。大多数女性在30岁之后,卵巢开始衰老,储备功能逐渐降低,随着年龄增长生育力继续下降,因
3、此年龄成为影响女性生育能力最重要的因素。卵巢衰老是机体衰退的一部分,引起其它组织器官衰老的因素也可能参与卵巢的衰老。阿尔茨海默病(Alzheimer’Sdisease,AD)是中枢神经系统退行性疾病,也是一种年龄相关性疾病。目前认为淀粉样前体蛋白(Amyloidprecursorprotein,APP)是AD发病机制的关键环节。APP是一个跨膜蛋白,在机体多种细胞表达,本身具有多种生物学功能。它经不同分泌酶作用有两条分解途经,由Ct.分泌酶分解产生可溶性APPtx(sAPPa),后者已被证实能促进
4、多种细胞的增殖,发挥类似生长因子的功能。APP经p.分泌酶途径产生sAPPl3和A13,All聚集后产生毒性是AD发病的核心。AD可作用于多种细胞表面受体经过一系列级联反应,最终可引发细胞凋亡。APP及其分解产物在神经系统的作用已有深入研究,但在生殖系统尚无研究报道。多囊卵巢综合征(PolycysticOvarySyndrome,PCOS)是育龄期妇女常见的内分泌紊乱性疾病,是卵巢无排卵性不孕最常见原因,有着多种血清激素的特征性改变和多种代谢异常。PCOS患者体内(包括卵巢组织)氧化应激水平增加,
5、有学者发现PCOS患者血清AGEs水平增高,颗粒细胞上AGEs受体(RAGE)摘要表达也增加。晚期糖基化终产物(advancedglycationendproducts,AGEs)是体内还原糖的醛基与非酶类蛋白质、脂质或核酸发生非酶糖化反应形成的代谢副产物,被认为是氧化应激状态的一个潜在强诱导剂,AGEs.RAGE可能通过增加ROS的产生,增加氧化应激状态,参与PCOS的发生。RAGE有多种配体,而APP分解产物AB也是其中之一,RAGE在AD介导的氧化损伤中扮演重要角色。在神经系统的研究显示A[
6、3可以作用于细胞表面的RAGE通过激活NF.kB信号通路产生氧化应激。本研究通过检测卵巢颗粒细胞中APPmRNA及蛋白水平的表达情况,检测其分解产物sAPPa和sAPPl3在卵泡液中的水平,验证APP、sAPP在卵巢中的表达,初步探讨它在女性生殖系统可能发挥的作用;并比较APP和RAGEmRNA在PCOS患者颗粒细胞中的表达以及卵泡液中sAPP和AGEs的水平,初步探讨APP、AGEs.RAGE与PCOS间可能存在的关系。第一部分卵巢颗粒细胞和卵泡液中淀粉样前体蛋白及其分解产物表达情况【研究目的】
7、检测淀粉样前体蛋白(APP)及其分解产物sAPPa和sAPPfl在经IVF/ICSI治疗的不孕症妇女卵巢颗粒细胞(GC)和卵泡液(FF)中的水平,证实卵巢中存在APP及sAPP的表达,探讨其表达情况与妇女生育年龄的关系。【研究方法】1、本研究经南方医院伦理委员会批准,标本收集经患者知情同意。选择2013年1月至2014年1月在南方医院生殖中心因输卵管性因素或(和)男性因素接受体外受精/卵母细胞浆内单精子注射.胚胎移植(ⅣF/ICSI.ET)治疗的不孕症患者106例。所有患者采用黄体中期降调节长方案
8、促排卵,后行经阴道取卵术,收集颗粒细胞(GC)及第一个穿刺卵泡的卵泡液(FF)。II硕士学位论文2、用Percoll分离法收集颗粒细胞。Trizol法提取总RNA并逆转录为cDNA,后行APP基因实时荧光定量PCR(real-timePCR),采用AACt法计算APPmRNA相对表达量。RIPA法提取颗粒细胞总蛋白,后行蛋白免疫印迹法(westernblot)测定颗粒细胞APP的相对表达量。FF收集后离心留取上清,用酶联免疫吸附方法(ELISA)测定卵泡液中sAPPa和sAPPJ3
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