抗肿瘤活性菌的培养优化及活性物质研究

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1、分类号——UDC——学号丛!!Q225密级——理学硕士学位论文抗肿瘤活性菌的培养优化及活性物质研究扬州大学二O一四年五月ClassifiedIndex：U．D．C．：M．S．DissertationThestudyonthecultureoptimizationandactivesubstancesofantitumotactivitemicrobesMajor：EnvironmentalScienceAdviser：MiaoLiGraduateStudent：ZhouHui．ruYangzhouUniversityMay2014周惠茹抗肿瘤活性菌的培养优化及活性物质研究抗肿瘤活性菌的培养优

2、化及活性物质研究摘要由于动植物资源的不合理开发和利用，带来了一系列环境问题，人们开始意识到微生物资源的重要性。在微生物资源的开发过程中，微生物药物，尤其是抗肿瘤微生物药物的开发，渐渐成为该领域的研究热点。本文选取了在前期研究中发现的两株抗肿瘤活性菌株，米曲霉彳印P曙f，，“sD秽Z口PYX．5和微小链霉菌&—印幻叼圮嚣p口W甜，埘HY026，对其发酵培养基进行优化，以优化后的培养基开展规模化发酵，提取出代谢产物，以抗肿瘤活性为指导，提供一定的理论基础和潜在的应用价值。本文的主要研究结果如下：(1)以察氏培养基为基础培养基，以发酵后的菌体干重、粗提物质量和粗提物抗肿瘤活性为指标，通过单因素实验

3、选出合适的碳源和氮源，再以选出的碳源、氮源以及K2HP04、MgS04·7H20、KCl共5个因素进行正交实验，确定米曲霉彳．D垆韶YX．5的最适发酵培养基配方，最终确定的培养基配方为：葡萄糖45g／L，蛋白胨8g／L，K2HP040．5∥L，MgS04‘7H20O．2g／L，KCllg／L，FeS04O．01∥L。优化后菌体干重、代谢物的产量和抗肿瘤活性分别提高了41．88％、226．52％和19．31％。(2)以高氏一号培养基为基础培养基，通过单因素实验选出适合微小链霉菌Sp删”，淞HY026的碳源和氮源，最终确定的培养基配方为：可溶性淀粉20．Og／L，黄豆粉20．O∥L，K2HP04

4、O．5g／L，MgS04’7H20O．5g／L，NaCl0．5∥L，FeS04。7H20O．019／L。优化后菌体干重、代谢物的产量和抗肿瘤活性分别提高了299．22％，65．31％和27．58％。通过对两株菌发酵培养基的优化，明显提高了代谢物质产量和抗肿瘤活性，这对后期的规模化发酵中减小发酵规模和降低工作量十分有利。(3)米曲霉彳．D形阳PYX．5经规模化发酵60L后得到粗提物22．91g，以极性大小为依据，对粗提物进行两次减压硅胶柱层析，活性组分主要集中在30：1、20：1和15：1的二氯甲烷／甲醇相中，将这些活性组分混合，进行减压ODS柱层析，甲醇水梯度洗脱，分段收集，经抗肿瘤活性测试

5、发现活性较高的组分为50％和60％甲醇洗脱的馏分，这两个组分的极性相近，因此将这两个组分混合，以分子量大小为依据，经葡萄糖凝胶柱层析，得到纯度较高的活性组分，经过核磁共振分析和质谱分析，确定其为羟基曲霉酸。II扬州大学硕士学位论文(4)微小链霉菌Sp删甜，“sHY026经规模化发酵80L后得到粗提物5．013g，以不同比例的二氯甲烷／甲醇溶液作为洗脱溶剂，经两次减压硅胶柱层析，得到两个纯度较高的活性组分，经HPLC检测发现两个组分中主要成分一致，对其进行核磁共振分析和质谱分析，确定其为放线菌素D。关键词：微生物资源，抗肿瘤活性物质，培养基优化，代谢产物分离，结构鉴定周惠茹抗肿瘤活性菌的培养优

6、化及活性物质研究IllThestudyonthecultureoptimizationandactivesubstancesofantitumoractivitemicrobesAbstractDuetoaseriesofenvironmentalproblemscausedbytheunreasonabledevelopmentandutilizationofanimalandplantresources，peoplehaverealizedtheimportanceofmicrobialresources，especiallyinthefieldofbioactivenaturalpro

7、ductsdevelopment．Inthiscase，thedevelopmentofmicrobialagents，especiallyofantitumoragents，hasbecomeoneofthehottesttopicstheseyears．Inthispaper,wehadoptimizedthefermentationmediumoftwoantitumorisolates--Asperg