新型混合模式介质制备及牛初乳免疫球蛋白分离研究

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1、⑧论文作者签名：叠壶董砬指导教师签名：—型竺逊论文评阅人1：隐垒迁阅评阅人2：隐垒迁阅评阅人3：隐垒迁阅评阅人4：评阅人5：委员4．委员5：lIIIIIIIlIIIlUlIIlIIILIIIbIIIlIIIIIIIIIIILIIlUlY2558651浙江大学研究生学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得逝姿盘堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明

2、并表示谢意。学位论文作⋯阳"撕期：∥渺年汐月，名学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解逝’江盘鲎有权保留并向国家有关部门或机构送交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权迸姿盘鲎可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学馘文储繇P石j枷签字日期：矽1计年石月、o日导师签名：f￡签字日期：№tu年6月，D日浙江大学硕士学位论文致谢在即将离开求是园之际，万千感慨。浙大的生活已永远地烙印在我的心里，这里凝聚了太多美好的回忆，让我品味欢乐，经

3、历磨练，享受生活。多年来，我的导师姚善泾教授对我的学习和生活给予了热情的关怀，倾注了大量的心血和汗水。姚老师渊博的知识、严谨的态度和宽广的情怀让我一直敬仰，使我终身受益，是我永远的楷模。在实验和论文写作过程中，我得到了林东强教授的悉心指导。林老师在工作中表现出的兢兢业业和踏实严谨，在科研上展现出的开阔视野和敏捷思维，在生活里流露出的平易近人和乐观豁达都深深地感染了我，是我心目中良师益友的典范。在此，由衷的感谢两位栽培我的导师，献上我最诚挚的敬意!课题组的关怡新教授和梅乐和教授在生活中给予的关心，在实验中给予的建议也非常的宝贵，特别还要感谢朱自强教授高深的学术造诣

4、和精益求精的科研精神给我们小辈们深深的感染和启发。在这里，我还要感谢陪伴我度过多年学习生活的朋友们。倪宏亮、夏海锋、赵瑶、王明君、沈冬钱、李鸣明等师兄师姐，陈慧英、杜悦娴、徐立仁、陈莹莹等同学，还有庄甜甜、马佛养等师弟师妹。最后，感谢我的父母、妻子和两位可爱的小宝宝，你们永远是我精神上的动力!感谢浙大12014年4月求是园浙江大学硕士学位论文摘要混合模式层析是一种新型的生物分离方法，其功能配基兼具多种相互作用模式，吸附容量大，选择性高，洗脱条件温和。本文结合亲硫层析和疏水性电荷诱导层析，筛选新型混合模式配基，制备新介质，并用于牛初乳免疫球蛋白的分离纯化。亲硫层析

5、对免疫球蛋白的特异性吸附需借助高盐浓度实现，而疏水性电荷诱导层析具有非盐依赖的吸附特性，本文结合两者优点，新型配基兼具亲硫作用、疏水作用和静电作用，在高盐和低盐条件下都可以高效吸附免疫球蛋白，且吸附能力随pH改变呈显著变化，可以实现高效洗脱。本文研究包括介质制备、吸附性能测定和牛初乳免疫球蛋白分离三部分。以Best,arose4FF琼脂糖凝胶微球为基质，经二乙烯基砜活化，偶联4．巯基乙基吡啶、2．巯基咪唑、2。巯基．1。甲基咪唑和3．巯基．1，2，年三氮唑等4种配基，制备了新型混合模式介质，分别命名为Bestarose．DVS．MEP、Bestarose．DVS

6、．MI、Bestarose-DVS—MMI和Bestarose．DVS．MTI。优化了基质活化和配基偶联的反应条件，配基密度约为60～70gmol／ml基质，偶联效率约60％。考察了新型混合模式介质对牛初乳免疫球蛋白的静态吸附性能和吸附动力学。结果表明，4种新介质具有吸附容量大和非盐依赖性吸附的特点，增加硫酸盐浓度能加快吸附过程，且对吸附量影响较小。Bestarose，DVS．MEP、Bestarose—DVS—MI和Bestarose—DVS—MMI对pH敏感，pH7吸附容量高，pH4可实现牛初乳免疫球蛋白的解吸。新型混合模式层析从牛初乳蛋白粉溶液中分离免疫球

7、蛋白。比较了不同介质的分离效果，发现Bestarose．DVS．MI是最合适的介质。进一步优化了层析分离条件，选择pH7进样，pH4洗脱，进样浓度25mg／ml，进样量lml，牛初乳免疫球蛋白纯度达95％，纯化因子为6．2，收率约64．2％。本文筛选出2．巯基咪唑作为混合模式新配基，制备了新型混合模式介质，用于分离牛初乳免疫球蛋白，取得了较好的结果，为牛初乳高附加值产品制备提供了新方法。关键词：混合模式层析，吸附剂，免疫球蛋白，牛初乳H浙江大学硕士学位论文AbstractMixed—modechromatographyisanewtypeofbiological

8、separationte