苦皮藤内生真菌a10代谢产物的杀菌活性

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1、http://www.paper.edu.cn苦皮藤内生真菌A10代谢产物的杀菌活性及杀菌成分的研究＊钱勇杨春平姬志勤龙建友李君浩吴文君（西北农林科技大学农药研究所，陕西杨凌712100）摘要：从苦皮藤根皮中分离得到一株内生真菌，编号为A10。对其代谢产物进行了杀菌活性研究。生物测定结果表明，A10菌株发酵产物菌丝体的甲醇和乙酸乙酯提取物对多种病-1原真菌具有较强的杀菌活性。其中乙酸乙酯提取物的杀菌活性较甲醇好，在1000μg·mL浓度下对烟草赤星病菌、小麦根腐病菌、玉米大斑病菌、番茄灰霉病菌、苹果轮纹病菌

2、5种供试菌的菌丝生长抑制率均大于90%。盆栽试验结果表明，A10菌株发酵产物菌丝体的乙-1酸乙酯提取物在2000μg·mL浓度下对小麦白粉病菌的治疗和保护作用均在70%以上。以生物活性追踪为指导，对活性较好的菌丝体乙酸乙酯提取物部分进行了杀菌活性成分的分离，得到化合物QY01，在浓度为50μg/ml时，QY01对烟草赤星病菌孢子萌发的抑制率高达11398.4％。采用高分辨质谱、HNMR和CNMR技术，将该化合物鉴定为细胞分裂抑制素D,为首次报道该化合物具有农用杀菌活性。关键词：苦皮藤；内生真菌；代谢产物；杀

3、菌活性从微生物代谢产物中寻找控制有害生物的生物农药是当前新农药研究开发的一个重[1][2]要途径。自从Stierle等从短叶红豆杉(Taxusbrevifolia)中分离得到一株能够产生与宿主相同的抗肿瘤代谢产物紫杉醇的内生真菌（Taxomycesandreanae）之后，从内生真菌次级代谢产物中寻找有重要生物活性物质的研究也逐渐成为筛选新型农药的热点。如[3]Findlay等从胶冷杉（Abiesbalsamea）、云杉(PideamarianaBSP)、北美落叶松(Larixlaridina)等针叶树的内

4、生真菌的次生代谢产物中发现了对枞色卷蛾(Christoneura[4]fumiferana)有生物活性的一系列物质。Strobel等从卫矛科药用植物雷公藤(Tripterygeumwilfordii)中分离到的内生真菌(Cryptosporiopsiscf.quercina)能产生一种新酰胺生物碱(cryptocin)，对稻瘟病菌(Pyriculariaoryzae)及其他多种植物病原真菌有较强的抑杀作用。为了开发我国具有自己知识产权的新型生物农药，近年来我们通过广泛分离、筛选，从陕西秦岭地区采集的杀虫植物

5、苦皮藤根皮中分离出了一株内生真菌，其代谢产物具有显著的杀菌活性，现将对此菌株农用活性的研究结果报道如下。本课题得到高等学校博士学科点专项科研基金（20020712011）、国家863高技术研究发展计划（2002AA245121）资助[作者简介]：钱勇（1982－），男（汉族），湖北大冶人，在读硕士研究生，主要从事天然产物分离研究。＊[通讯作者]：吴文君（1945－），男（汉族），四川洪雅人，教授，博士生导师，主要从事农药化学和农药毒理学研究。电话：029-870921911http://www.paper.

6、edu.cn1材料与方法1.1菌株来源从陕西秦岭地区采回的苦皮藤根皮中分离得到一株内生真菌，编号为A10。1.2供试病原菌和植物（1）供试病原菌：番茄灰霉病菌（Botrytiscintrea）,苹果腐烂病菌(Valsamali),玉米大斑病菌(Exserohilumturcicum),烟草赤星病菌(Alternarialongipes),小麦根腐病菌(Bipolarissorokiniana)，苹果轮纹病菌(Macorphomakawatsukai)，马铃薯干腐病菌(Fusariumcoeruleum)，西

7、瓜枯萎病菌（Fusariumbulbigenum）。(2)盆栽植物。小麦,品种为辉县红。1.3试剂与仪器HPD-100大孔吸附树脂（河北沧州宝恩化工有限公司），200～300目柱层析硅胶（青岛海洋化工），Waters486高效液相色谱（分析型），大连依力特制备液相，X4型显微熔点测定仪（温度未校正），RrukerSPEXⅡ质谱仪，BrukerRPX300,BrukerRP500核磁共振仪。1.4液体培养及活性成分的提取液体培养采用改良的MID培养液（土豆200g,蔗糖10g,葡萄糖10g，乙酸钠1.66g，

8、硫酸镁1.02g，蛋白胨0.5g，水1000ml）,在无菌条件下直接将带菌培养基分别装入加有定量液体培养基的三角瓶中,用透气封口膜封口，置于28℃，190r/min的条件下摇床振荡培养7d。发酵产物以双层纱布过滤,菌丝体晾干后分别用石油醚，乙酸乙酯，甲醇依次提取。1.5菌丝体的提取物的抗菌活性测定1.5.1离体生测将内生真菌的菌丝体的粗提物配成一定浓度的溶液,测定其对病原菌菌丝生长抑制作用及孢子萌发抑制作用。[5