克班宁与大鼠血浆蛋白结合的初步研究

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1、万方数据第29卷第3期2006年6月云南中医学院学报JournalofYunnanCollegeofTraditionalChineseMedicineV01．29No．36．2006克班宁与大鼠血浆蛋白结合的初步研究*商庆节，马云淑，程欣(云南中医学院中药学院，云南昆明650200)摘要：目的：研究克班宁注射剂中克班宁在大鼠血浆中的蛋白结合率。方法：采用平衡透析法，以HPLC法测定克班宁大鼠血浆中的蛋白结合率。结果：浓度为1．0×10～、2．5×10．1、1．25×10。3mg／ml的克班宁在大鼠血浆中的蛋白结合率分别

2、为91．7l％、95．62％、96．21％．结论：克班宁在大鼠血浆中的结合率较高。关键词：克班宁；注射剂；大鼠；血浆蛋白结合率中图分类号：R285．6文献标识码：A文章编号：1000一2723(2006)03—0014_加3克班宁(Crebanine，Cre)系从防已科千金藤属(Stephania)部分植物(俗称“山乌龟”)中提取的异喹啉类生物碱，据实验研究⋯1，克班宁对多种实验性心律失常具有较强的对抗作用，且作用迅速，文献报道【2’3J它还具有镇痛，镇静，解痉，抗惊厥，调节白血病耐药细胞的多药耐药性，拮抗组织胺所致豚鼠

3、胆囊的收缩等作用，是一值得深入研究开发的生物活性物质。为了充分利用该药物资源，为将其开发为新药奠定基础，本实验采取平衡透析法来测定克班宁注射剂中克班宁在大鼠血浆中的蛋白结合率，以得到关于合理用药和药物相互作用的有价值的资料。1仪器、试剂与动物1．1仪器LC一9A高效液相色谱仪(13本SHIMADZU公司)；SPD一10AVP紫外检测器(SHIMADZU公司)，AT一130色谱柱恒温箱(天津奥特赛恩斯仪器有限公司)；SnakeSkin平衡析袋(标称分子量3500，U．s．APIERCE)；电子天平(瑞士Precisa公司)

4、；Eppendorf移液器(德国)。1．2实验动物Wistar大白鼠5只，购自云南生物制药有限公司(合格证号：0001927)。1．3药品克班宁对照品(Crebanine，自制，经TLC加大10倍量点样检测无杂质点；HPLC峰面积归一法测纯度为98．6％，其它各项理化指标均符合对照品要求。结构式见图1)；克班宁注射剂14J(自制，含克班宁0．25％)。试剂：磺基水杨酸(天津市化学试剂三厂)；肝素(昆明杰辉生物技术有限公司)；甲醇为色谱纯；水为纯水；其它试剂均为分析纯。0c马图1克班宁结构式2实验方法2．1克班宁系列标准品

5、的制备精密称定克班宁标准品10rag置于100mL的容量瓶中加甲醇定容。配成克班宁标准品的浓度为0．1mg／rnL，再精密吸取5、1、0．5、0．1、0．02rnL的上述标准品溶液置于10mL的容量瓶中加甲醇定容，即得浓度为5×10～、1×10～、5×10～、1×10～、2×10。4mg／mL的系列克班宁标准品溶液。2．2色谱条件*基金项目：云南省自然科学基金项目(NO：2002C006Z)收稿日期：2006__0l一10修回日期：200删—04作者简介：商庆节(1981～)，男，山东日照人，本院2003级硕士研究生，主

6、要研究方向：中药资源开发与利用。14万方数据第3期商庆节，等：克班宁与大鼠血浆蛋白结合的初步研究LLula—C18色谱柱(150×4．60mm，5脚)；柱温30℃；流动相：甲醇一水(70：30)，(每1L流动相加人三乙胺20出)；流速：1mL／min；检测波长282nm。2．3血浆样品的制备将透析袋剪成5em左右长度的管，置于pH7．4的缓冲液中浸泡24h，将透析袋下部用细线扎紧。取10mL用缓冲液稀释的不同浓度的克班宁注射液置于具塞的储液小瓶中。再精密量取500t-L肝素抗凝的大鼠血浆置透析袋中，透析袋上方用细线扎紧后

7、悬于储液瓶内，调整透析袋内、外液面处于同一水平线上。将储液瓶置于5℃的冰箱中平衡透析72h。透析后用30％磺基水杨酸检查透析袋外有无蛋白质泄漏，若有浑浊出现说明此袋泄漏，将其弃去不用。平衡透析后，取出透析袋精密量取200／-L透析袋内血浆置具塞试管中，再精密加入2．8mL甲醇于试管中，试管于涡旋振荡器上振荡1min，再于A离心机上以10000r／min转速离心20min，抽取上清液于一次性有机过滤器(孔径0．45tan)上过滤。精密吸取过滤液2mL置于5rnL容量瓶内，并于60。C水浴上氮气流吹干，用200tzL甲醇复溶

8、残留物，取20／比L进样分析。透析袋外的缓冲液用水系过滤器(孔径0．45tan)过滤后精密吸取20t-L直接进样分析测定。2．4分析方法的确证2．4．1色谱系统适用性试验在上述色谱条件下，空白血浆加上述克班宁标准品后进行测定，克班宁的分离度大于2．5，理论塔板数按克班宁计算大于4000。2．4．2方法选择性试验通过将