含csfv t细胞表位的猪细小病毒样颗粒的表达及小鼠试验免疫研究

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1、农业生物技术学报JournalofAgriculturalBiotechnology2007,15(5):746~751·研究论文·含CSFVT细胞表位的猪细小病毒样颗粒的表达及小鼠免疫试验*1,2, 左玉柱2,唐丽杰1, 李一经1**范京惠（1.东北农业大学动物医学院，哈尔滨150030；2.河北农业大学动物科技学院，保定071001）摘要：将纯化的重组子pMVP2E290阳性质粒利用杆状病毒表达系统进行表达，表达产物应用SDSPAGE、Westernblot和DotELISA进行分析，确定所表达的蛋白分子量大小

2、约为67kD，且具有天然蛋白的抗原特异性。应用免疫电镜对表达产物进行观察，可见到细小病毒样颗粒。病毒样颗粒在无免疫佐剂参与的情况下，免疫6~8周龄的BALB/c小鼠，同时设猪细小病毒(,PPV)的灭活疫苗免疫组及磷酸盐缓冲液(PBS)接种组作为参比对照，检测小鼠的细胞免疫和体液免疫学指标。结果表明，表达蛋白所形成的细小病毒样颗粒，不仅能诱导小鼠机体产生抗猪瘟病毒的特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)反应，还能刺激小鼠产生高效价的抗猪细小病毒的特异性抗体,而且机体所产生的抗体效价显著高于灭活疫苗对照组。关键词：猪细小病

3、毒样颗粒;表达;免疫原性;细胞毒性T淋巴细胞（CTL）中图分类号:S188文献标识码:A 文章编号:10061304(2007)05074606Expressionof likeParticlesCarryingaCSFVTCellEpitopeandItsImmunizationonMiceFANJinghui 1,2,ZUOYuzhu 2,TANGLijie1,LIYijing 1** Todevelopastrategyforpromotingefficientantiviralimmunity,thechi

4、mericlikeparticles(PPV: VLP)carryingaTcellepitopefromthe(CSFV)nonstructuralproteinNS23wereexpressedbythebaculovirusexpressionsystemanditsimmunogenicityonmicewasanalysed.SDSPAGE,WesternblotandDotELISAanalysisshowedthattheexpressedproductwas67kDinsizeandhadaclea

5、rpositivereactionwithspecificantiseraagainstPPVandCSFVpeptide. Electronmicroscopyanalysisconfirmedtheparticlestructureoftheprotein.Miceimmunizedwiththesecombinantparticles,inthe absenceofadjuvant,developedhighlevelsofPPVspecificIgGintheirserum.Thelevelsofantib

6、odiesweresignificantlyhigherthanthoseoftheantibodiesfrommiceimmunizedwithPPVsterilevaccine.Moreover,immunizationwithparvoviruslikeparticlescarryingtheCSFVTcellepitopealsoelicitedapeptidespecificcytotoxicTcell(CTL)response.TheseresultshighlightthatPPV:VLPasasaf

7、e,nonreplicatingantigentodeveloppaticulcatevaccinehashighpotential. likeparticles;expression;immunogenicity;cytotoxicTcell(CTL)猪细小病毒(,PPV)是一种自影响病毒样颗粒的形成（Sedlik ,1995;Sedlik 主复制性DNA病毒，其基因组编码2种结构多肽,1997;Florence,2005），作为抗原的转运载（VP1和VP2）及3种非结构蛋白NS1、NS2和NS3 体具有很大的应

8、用价值。(Rodrigo ,2003)。其中VP2核衣壳蛋白是PPV猪瘟病毒(,CFSV)是的主要保护性抗原，在体外表达后可以自我装配成引起猪瘟的病原，相应于其非结构蛋白NS23的病毒样颗粒（Martinez,1992;Sedlik ,1995; 1446~1460氨基酸残基的多肽E290(KHKVRNEVRueda,2004），且在其5'端连接一小段基因不