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《恶臭假单胞菌na_1菌株烟酸羟基化酶活性的诱导和转化条件的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、45卷 4期微生物学报Vol.45No.42005年8月ActaMicrobiologicaSinicaAugust2005恶臭假单胞菌NA-1菌株烟酸羟基化酶活性的诱导和转化条件的研究3陆伟宏 王 鑫 徐 莉 戴亦军 袁 生(南京师范大学生命科学学院江苏省资源生物技术重点实验室南京师范大学微生物工程重点实验室 南京 210097)摘 要:恶臭假单胞菌NA-1菌株的培养和产酶特性与已报道的产酶菌株粘质沙雷氏菌(Serratiamarcescens)IFO12648和荧光假单胞菌(Psudomonas
2、fluorescens)TN5有所不同,主要反映在最适碳源及浓度、最适诱导剂浓度和最适培养温度等方面。最适的转化条件是温度为30℃,pH为710,烟酸的浓度为3%。采用初步优化后的条件和流加底物的方式进行4L上罐生产,恶臭假单胞菌NA-1菌株的6-羟基烟酸产率可达到108139gPL。关键词:烟酸,6-羟基烟酸,生物转化,恶臭假单孢菌中图分类号:Q93 文献标识码:A 文章编号:000126209(2005)0420551205 工业生物转化技术被认为是“生物技术的第三[1,2]1 材料和方法次浪潮”
3、,生物转化法具有效率高、专一性强、条件温和、环境友好的特点,可用于降低化学工业的原111 材料料消耗、水资源消耗、能量消耗,减少污染物的排放11111 菌种来源:本实验室筛选保藏的恶臭假单胞[15]扩散,也可用于手性药物的不对称合成和对映体的菌(P.putida)NA-1菌株。拆分。积极开展对生物转化技术领域的研究,对经11112 培养基:种子培养基:每升含酵母粉5g,蛋[3]济及社会发展有极为深远的意义,目前国内已有白胨10g,NaCl10g,烟酸10g,pH710。斜面和平板培一些这方面的成果报道,如微
4、生物法生产丙烯酰养基:每升含酵母粉5g,蛋白胨10g,NaCl10g,烟酸[4～6][7]胺、木糖代谢工程菌的构建、花生蛋白废水的10g,琼脂20g,pH710。发酵培养基:每升含碳源[8]转化等,但未见开展微生物转化烟酸生产6-羟基10g,氮源10g,酵母粉1g,烟酸10g,K2HPO41g,金属烟酸的研究。离子液10mL,pH710。金属离子液配方如下:每升6-羟基烟酸是一种重要的农药、医药和染料中CaCl2014g,H3BO4015g,CuSO4·5H2O0104g,KI[9～11]间体。例如它可用于
5、合成以吡虫啉、吡虫清为011g,FeSO4·7H2O012g,MnSO4·7H2O014g,ZnSO4·[9]代表的吡啶甲胺类农药。由于6-羟基烟酸广阔的7H2O014g,H2MoO4·2H2O012g,MgSO4·7H2O50g。开发前景,微生物转化生产6-羟基烟酸已经成为国上罐培养基:每升含玉米浆30mL,豆粕6g,烟酸[12～14]外研究热点。当前,都是从国外进口6-羟基烟10g,0102mol磷酸钾盐,pH710。酸来满足国内需求,且价格昂贵。为了填补国内空11113 仪器设备:Smart3000型
6、分光光度计购自白,提高经济效益,并为创制具有自主知识产权的新Bio-Rad公司,3K30高速冷冻离心机购自Sigma公农药奠定坚实基础,本实验室进行了大量的菌种筛司,HD-930型全温摇床购自博莱特实验仪器厂,选,得到一恶臭假单胞菌(Pseudomonasputida)NA-1GUJST-7013型7L发酵罐购自镇江东方生物工程有[15]菌株,它能高效的将烟酸转化成6-羟基烟酸,显限公司。示了良好的工业化应用前景。本文报道恶臭假单胞112 菌体培养方法菌NA-1菌株烟酸羟基化酶活性的诱导和转化条件冻存管菌种
7、接种于平板30℃培养24h后,转接的研究结果,以便使该菌株能够早日应用于工业入种子培养液中(20mL装液量P100mL锥形瓶),生产。30℃、200rPmin摇瓶培养12h,以0115%的接种量接基金项目:国家“十五”科技攻关项目(2001BA308A05-02)3通讯作者。Tel:86-25-83598790;Fax:86-25-83598723;E-mail:shengyuan@email.njnu.edu.cn作者简介:陆伟宏(1974-),男,湖南人,硕士研究生,主要从事微生物转化研究。E-mail
8、:luweihong168@sohu.com收稿日期:2004-11-15,修回日期:2005-04-10552微生物学报 ActaMicrobiologicaSinica2005,Vol.45No.4入发酵培养基(20mL装液量P100mL锥形瓶),30℃、200rPmin培养22h。113 生物量的测定在分光光度计600nm处(110cm光径)测定稀释20倍的菌体培养液的OD600,以同样稀释度的培养基为对照
