8染hvegf165基因的调控作用及其规律的研究

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1、徐州医学院硕士学位论文HRE对兔缺血心肌转染hVEGF<,165>基因的调控作用及其规律的研究姓名：王强申请学位级别：硕士专业：外科学（胸心外）指导教师：张中明20070301徐州医学院硕士学位论文缩略词DEPCEDTAHIF-lHRE珊CPBSReal．timePCRrAAVRTTBSVEGFX—gal缩略词表Abbreviation英文全称DiethylPyrocarbonateEthylenediaminetertraacetieHypoxia-induciblefactor-IHypoxieresponseelementsImmunohistochemistryPho

2、sphatebalancedsolutionReal-timePolymerasechainreactionRecombineadeno．associatcdviralReversetranscriptionTrisbalancedsolutionVascularendothelialgrowthfactorGalactosidae中文全称焦碳酸二乙脂乙二胺四乙酸低氧诱导因子．1低氧反应元件免疫组化磷酸盐缓冲液实时定量聚合酶链式反应重组腺病毒相关病毒逆转录"Iris盐缓冲液血管内皮生长因子半乳糖苷酶徐州医学院硕士学位论文论文独创性声明本论文(HRE对兔缺血心肌转染hVEGF。

3、基因的调控作用及其规律的研究》是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或机构已经发表或撰写过的研究成果。其他同志对本研究的启发和所做的贡献均已在论文中作了明确的声明并表示了谢意。作者签名：玉』垂。日期：2嫂2笙5目圭星论文使用授权声明本人完全了解徐州医学院有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存论文。保密的论文在解密后遵守此规定。作者签名：盖‘基导师签名：日期：2螳玺5目盈徐州医学院硕士学位

4、论文论文审阅认定书研究生量i翌、在规定的学习年限内，按照研究生培养方案的要求，完成了研究生课程的学习，成绩合格；在我的指导下完成本学位论文，经审阅，论文中的观点、数据、表述和结构为我所认同，论文撰写格式符合学校的相关规定，同意将本论文作为学位申请论文送专家评审。导师签名：日期：2QQ2生5目；名化徐州医学院硕士学位论文HRE对兔缺an,b肌转染hVEGFl65基因的调控作用及其规律的研究中文摘要目的：在缺血心脏动物在体水平，探讨9拷贝低氧反应元件(hypoxieresponseelcments'HRE)对外源性人血管内皮生长因子165(humanvascularendothe

5、lialgrowthfactor,hVEGFiss)表达调控作用，观察hVEGFl65促进缺血心肌血管生成规律及中期效果。方法：采用外科手术方法结扎冠状动脉，建立兔缺血心脏动物模型。于心肌梗死区标记点处注射rAAV-9HRE-hVEGFⅢ，根据转染病毒的不同，将实验动物随机分为3组：A组(转基因组)：结扎冠状动脉的左室降支，缺血区域分4点注射40mrAAV一9HRE．hVEGFl65(万=42)；B组(缺血对照组)：结扎冠状动脉的左室降支，缺血区分4点注射40“lO．01MPBS(一=42)；C组(基因对照组)：结扎冠状动脉的左室降支，缺血区分4点注射40山rAAV．9HRE

6、．LacZ(开=24)．再根据心肌缺血时间的不同，将A、B组随机分为7组，分别于术后0，2，4，6，8，10，12周取材，相应分为TA0，T^2，1’A4，TM，T^8，T▲Io'T■2时间点；C组随机分为4组，分别于术后0，2，6，12周取材，相应分为Tco，配，Tc6，Tcl2。A、B、C组每个时间点6只动物(玎=6)。在实验设计时间点，取标记区缺血心肌组织，分别液氮保存及10％中性甲醛固定。采用免疫组化、QuantitativeReal．timePCR法及WcstcmBlot方法测定A、B组中HIF．1a、外源性hVEGFl65基因及其血管内皮标记蛋白CD31、2徐州医

7、学院硕士学位论文血管平滑肌标志SMA的表达；采用X．Gal染色、免疫组化、Real．timePCR测定C组中LacZ、hVEGFl65mRNA及CD31的表达。结果：一，缺血心肌转染rAAv-9HREmvEGFl‘5的表达以rAAV为载体的hVEGFl65能转染成熟心肌细胞，并长期、有效的表达。二，缺血心肌HIF-la表达测定结果1．Real．timePCR测定显示，A，B组均可见内源性HIF．1amRNA表达。HIFIamRNA表达呈先增加后减少的趋势。T0时，A、B组表达最低，T2时，HIF．1am