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《转基因克隆奶山羊大量生产重组人的抗凝血酶iii蛋白质(rhatiii)》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、生物工程学报ChinJBiotech2008,January25;24(1):117-123journals.im.ac.cnChineseJournalofBiotechnologyISSN1000-3061cjb@im.ac.cn©2008InstituteofMicrobiology,CAS&CSM,Allrightsreserved.研究报告转基因克隆奶山羊大量生产重组人的抗凝血酶III蛋白质(rhATIII)111112211邹贤刚,袁三平,鲜建,赵雅琳,李狄尔,王玉阁,郝茹,解居伦,刘身庆,杜2淼1青
2、岛森淼生物技术研究所,山东2661012中国科学院遗传和发育生物学研究所,北京100080摘要:利用转基因克隆奶山羊乳腺生物反应器大量生产重组人的抗凝血酶III(rhATIII)蛋白质。其中包括:筛选出人的抗凝血酶Ⅲ蛋白基因的cDNA序列;利用山羊的β－酪蛋白基因的启动区,终止信号和Enterokinase蛋白酶酶切DNA序列,构建在乳腺中特异表达rhATⅢ的表达载体。同时在转基因载体的末端连接一个新酶素筛选基因(Neomycin)。再以细胞转染、G418筛选和体细胞核移植(动物克隆)等过程,最后获得含有人的抗凝
3、血酶Ⅲ基因的转基因克隆奶山羊。我们共获得了5个原代转基因公羊。第一只克隆羊在出生后78d死亡,解剖表明:羊的肺部和肾脏等器官有异常。其它克隆公羊经过与崂山种母羊交配,得到转基因后代,其中两个原代转基因羊的后代母羊已成熟、所获得的奶经蛋白质电泳证明:转基因克隆羊后代奶中含有约60kD大小的rhATⅢ糖蛋白;经Elisa检测表明:在奶中含有大量活性的rhATⅢ,在来源于两个不同克隆公羊的后代母羊奶中的rhATⅢ含量分别为0.4mg/L和3g/L。此研究证明:转基因奶山羊可以大量地生产具有很高活性的rhATⅢ。用这种方
4、法生产的rhATⅢ通过蛋白质提纯,制成注射针剂,将可用于人的抗凝血酶III缺乏症的治疗、预防血栓和重大手术过程中的止血的作用等。关键词:山羊,乳腺生物发应器,转基因,克隆,重组人的抗凝血酶Ⅲ(rhATⅢ),胎儿成纤维细胞(FFC)LargeScaleProductionofRecombinantHumanAntithrombinIII(rhATIII)inTransgenicClonedGoats11111221XiangangZou,SanpingYuan,JianXian,YalinZhao,DierLi,Y
5、ugeWang,RuHao,JulunXie,12ShenqingLiu,andMiaoDu1QingdaoSamuelsBiotechnologyResearchInstitute,Qingdao266101,China2InstituteofGeneticsandDevelopmentalBiology,ChineseAcademyofSciences,Beijing100080,ChinaAbstract:Wereporttheproductionofrecombinanthumanantithrombin
6、Ⅲ(rhATⅢ)intransgenicclonedgoats.HumanATⅢmRNAwasisolatedfromhumanlivertissues,thentranscriptedintocDNA.ThehumanATⅢcDNA(withoutthefirst96basepairsequence)andEnterokinaserecognisedpeptide-DNAsequencewereligatedtoagoatbeta-caseinpromoterandpoly(A)singlingse-Recei
7、ved:March10;Accepted:August14,2007Supportedby:theNational973Project(No.2000016107)andtheQingdaoMunicipalScienceandTechnologyBureau(No.2001KNS-2N-29).Correspondingauthor:XiangangZou.E-mail:xiangang.zou@yahoo.com.cn国家973计划(No.2000016107)和青岛市科技局科技发展计划资助(No.2001K
8、NS-2N-29)。118ISSN1000-3061CN11-1998/QChinJBiotechJanuary25,2008Vol.24No.1quences,neomycinselectiongenewaslinkedattheendofthepoly(A)singlingregion.Themammaryexpressionconstructwastransfect
