限制性核酸内切酶puvⅱ识别序列外甲基化=一=抑制其酶切活性的分子机理研究

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1、科学通报第42卷第22期ChineseScienceBulletin1997年11月【研究简报】限制性核酸内切酶PvuⅡ识别序列外甲基化==一抑制其酶切活性的分子机理研究一，，。陈德风孙梅刘英苗史国利陈雅文‘(南开大学分子生物学研究所．天津300071)白质的相互作用，由此影响基因的表达，关于甲基化与限制性核酸内切酶之间的关系，以往的研究表明：限制性核酸内切酶识别序列内DNA甲基化可特异性地抑制该酶的酶切活性[．色体分离同步化机理及遗传控制研究提供了特殊材料．作者利用这种材料首次筛选并定位了一种控制小麦PMC减数分裂I染色体分离同步化的基因(另文报道)，为揭示染色体组形成及进

2、化、细胞分裂遗传控制等重要生物学问题提供了更多实验证据．致谢本工作为国家自然科学基金(批准号：39200070)和中国科学院西安分院特别基金资助项目．参考文献1PanayotovI1kcytoplaamofm，

3、4andwheatimprovement．ISCEW，YokohoraoJapm．1991．280—2922FedotovaVD．Charactexizadonofl0一a锄linesofCOlfll1]2taOttwhe且tc~fivarN朗∞

4、b_蜩hya67withcyt0asmofryein：Proe8thInterWIleatGenetSym(Ab宕劬吐sa

5、ndProgramme)，Beljing：ChinaAgricMtu~Sc~enteehPress，1993．43～443ZhengGC，MuSM．L∞JLAStuayofthenucleus*3qoplasm(NC)hybridof脚(2n=70)-Trizicumaeszizram(El")．In：Pro~8thinterWheatGenetSym，_峨jChinaAgricultualSelentechPress,1993449～4524TsujinmtoH．Por~yotovI，TsunewsklK．Behaviorofane盖t工achromosomesm-fled

6、by~lasmiecmoI1wheatllnehevtngAsropyron0州cy~ophsm．JapJGenet，l9盯．62：291～2995SuzukiT，NolmmmC．1waaaYIetDetermination。fhcmo~higousgroup。fteloceatrlcAgropyro~chnxn。目Ⅺ幛oanfer．ringnLIckLcyto鲳rccompatibilityonaBop]asmiclines∞m肿nwheatwithAgropyro~cytoplasms．In：Proe8thinterWheatOeaetSym．]~ijing；ChinaA

7、gfieultualSeientecbPress,1993．175～1806CsiXW．Productionandcyto~enetlcsTr／ticumf4i-Sem~ecerisehdandamphidlpicadIn：Ptoc8thInterWheatG~netSym．Beijiag：ChinaAgncultmlSeienteehPress．1993．361～3637LiZS，MuSM．ZhouHP．eta1．Theestablishment删applicationofblue-grainedmoIIcinwheatchromosome目1Bj．neerlngCerea

8、lResearchCommunic~dons，1986．14(2)：133～1378SearsERThe删PbBofcommonwheat．MissouriAgricE印StaResBul1．1954．572：1～599薛秀庄．吉万全，王社英，等“阿勃小麦穗定自交结实缺体系统的剖制．作物学报，1991，17(6)：417～423(1997．03．04收穑．199706-24收_醛改祷)2436科学通报第42卷1991年．陈德风等人首次发现并证实限制性核酸内切酶PvuR识别序列外DNA甲基化抑制酶切活性的现象，提出了“外甲基化”这一新概念【·．为搞清外甲基化现象的分子机理，我们

9、采用PCR定点诱变技术和酶切定量分析方法对识别序列外甲基化抑制PvuⅡ酶切活性效率与外甲基化的位置及数目的关系进行了深入探讨．1材料与方法PvuⅡ等限制性核酸内切酶、T4DNA连接酶、E．coliDNA聚合酶I大片段(Klenow)为华美生物工程公司产品．PCR试剂盒为Promega公司产品．所有化学试剂均为分析纯或优级纯．大肠杆菌HB101(dam．dem)和GMll9(dam，dcm一)由南开大学生物学系蒋如彰教授惠赠；pGEM4Z—ras和oSV2gpt．s、r400ri．anti．ras重组质粒