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《二斑叶螨几丁质酶基因的原核表达及多克隆抗体制备》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、网络出版时间：2015-01-1209:54网络出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/23.1391.S.20150112.0954.015.html第46卷第1期东北农业大学学报46(1):00~002015年1月JournalofNortheastAgriculturalUniversityJanuary2015二斑叶螨几丁质酶基因的原核表达及多克隆抗体制备12113张道伟，陈静，张正玲，曾燕玲，郭玉双（1.遵义师范学院生命科学学院/赤水河流域动物资源保护与应用研究重点实验室，贵州遵义563002
2、；2.遵义医学院生化与分子生物学教研室，贵州遵义563009；3.贵州省烟草科学研究院，贵阳550083）摘要：以制备的二斑叶螨cDNA为模板，克隆二斑叶螨几丁质酶SeChi基因功能结构域催化区片段，大小为786bp。将该序列片段克隆到表达载体pET-32a(+)中，获得多克隆原核表达载体pET-32a-TuChi。重组质粒经酶切测序鉴定后转化大肠杆菌BL21(DE3)，经0.6mmol·L-1IPTG诱导4h后高效表达约45ku可溶性重组蛋白；经His亲和层析洗脱和浓缩获得高纯度的重组蛋白免疫新西兰大白兔制备TuChi多克隆抗体。制备
3、的多克隆抗体经WesternBlot证实能特异性地识别几丁质酶而不与非特异性蛋白结合。ELISA分析表明制备的抗体效价达1?80000，效价较高，为进一步研究二斑叶螨几丁质酶相关功能奠定基础。关键词：二斑叶螨；几丁质酶；原核表达；多克隆抗体中图分类号：Q786文献标志码：A文章编号：1005-9369（2015）01-0000-06张道伟,陈静,张正玲,等.二斑叶螨几丁质酶基因的原核表达及多克隆抗体制备[J].东北农业大学学报,2015,46(1):00-00.ZhangDaowei,ChenJing,ZhangZhengling,et
4、al.ExpressionandpolyclonalantibodypreparationofchitinasegeneinTet-ranychusurticaeKoch[J].JournalofNortheastAgriculturalUniversity,2015,46(1):00-00.(inChinesewithEnglishabstract)ExpressionandpolyclonalantibodypreparationofchitinasegeneinTetranychusurticaeKoch/121ZHANGDaow
5、ei,CHENJing,ZHANGZhengling,ZENGYan-13ling,GUOYushuang(1.SchoolofLifeSciencesZunyiNormalCollege/KeyLaboratoryofProtectionandUtilizationofAnimalResourceinChishuiRiverBasin,ZunyiGuizhou563002,China;2.Depart-mentofBiochemistryandMolecularBiology,ZunyiMedicalCollege,ZunyiGuiz
6、hou563009,China;3.GuizhouTobaccoResearchInstitute,Guiyang550083,China)Abstract:ThesequenceofpartchitinasegeneofTetranychusurticaewasamplifiedbyPCRfromcDNA.Thesequencelengthofthisdomainwas786bp.Then,thegenewasclonedintopET-32a(+)prokaryoticexpressivevector,andtheconstruct
7、edrecombinantplasmidspET-32a-TuChiwastransformedintothehostbacteriaE.coliBL21(DE3).About45kufusionproteinwasabundantlyexpressedat4hafter-1+therecombinantvectorwasinducedwith0.6mmol·LIPTG.ThefusionproteinwaspurifiedonaNiaffinitycolumn.Thepurifiedchitinaseproteinwasusedtoi
8、mmunizeNewZealandrabbitsforpreparingpolyclonalantibodywithspecificityasdefinedbyWesternBlot.ELISAanalys
