促红细胞生成素后处理对大鼠再灌注损伤肺的保护作用及机制

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1、万方数据温州医科大学硕十学位论文损伤威的保控佳旦厘扭剑答辩委员会主席：盆正扮教援显州匡抖太堂答辩委员会成员：矍运查教授涅州医抖太堂附属三医论文答辩日期：2013．11．25．13：30万方数据温州医科大学硕士学位论文目录1111111111111111IY一2914889(一)论文中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯14分析与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯41结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯46参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯46(二)附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯49(三)致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯50(四)综述及参考文献正文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯51参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯57(五)独创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯60万方数据温州医科大学硕士学位论文促红细胞生成素后处理对大鼠再灌注损伤肺的保护作用及机制中文摘要目的：探讨外源性促红细胞生成素后处理对再灌注损伤肺的保护作用及机制方法：1．把

3、40只实验的雄性大鼠(体重200"-"2509)随机分成5组，每组有8只：即假手术对照组(C组)、肺缺血／冉灌注组(LIR组)、肺缺血／再灌注+促红细胞生成素组(EP0组)、促红细胞生成素+溶剂对照组l(0．4％DMSO的PBS溶液)(D组)、促红细胞生成素+U0126(U组)。腹腔注射5％水合氯醛，麻醉后仰卧固定在鼠台，予以气管插管，机械通气，左侧开胸，游离左Nl'-J，动脉夹夹闭，复制在体大鼠原位单肺缺血／再灌注模型。C组游离左肺门后不夹闭肺门，观察150min；I／R组游离并夹闭左肺门造成缺血30min，松开动脉夹再灌注120min；EPO组在再灌注同时尾静脉注射促红细胞生成素3000U

4、／kg，其余操作同LIR组；D组缺血前给予7．5ml／kg体重的0．4％DMSO的PBS溶液，余同EPO组；U组缺血前尾静脉注射ERKl／2信号转导通路的特异拮抗剂0．3mg／kgU0126(0．3mgU0126溶于7．5m10．4％DMSO的PBS溶液)。2．实验后取颈动脉血检测血清丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性、髓过氧化物酶(MPO)活性等生化指标的变化。3．采用原位末端标记法(TUNEL)检测肺组织凋亡情况，并计算凋亡指数(AI)。4．取肺组织测肺的湿／干重比(W／D)。5．免疫组织化学、RT-PCR法测定肺组织Bcl一2、Bax及Bcl一2mRNA、BaxmRNA表

5、达。6．在光镜及电子显微镜下观察肺组织形态学结构的改变，并测定肺损伤组织学定量评价指标(IQA)。结果：1．与C组比较，LIR组血清SOD活力显著降低，MDA含量、MPO活力显著升高俨均<0．01)；EPO组、D组、U组与LIR组相比，MDA含量、MPO活力显著降低，SOD活力升高(尸<0．05或P<0．01)；D组与EPO组比较两者无明显差异俨均>0．05)，U组与EPO组相比，SOD活力显著降低，MDA含量、MPO活力显著升高俾均

6、／D、IQA值显著降低∽均0．05)，U组与EPO组相比，U组肺组织W／D、IQA值显著升高(尸均<0．01)。3．TUNEL法测得，LIR凋亡指数显著高于C组，D组、u组、EPO组朋显著低于LIR组(P均0．05)，U组显著高于EPO组。4．免疫组化检测各组肺组织Bcl．2、Bax蛋白显示：在C组Bcl一2呈高水平表达、Bax表达不明显，LIR组表达较C组Bcl．2表达明显下降、Bax明显上调，同时Bcl一2／Bax的比值降低fP均

7、Bcl．2蛋白表达增强，Bax表达减弱，Bcl．2／Bax的比值增高fP均<0．叭)：与EPO组相比，D组无明显差异(尸>0．05)，U组Bcl一2蛋白表达下降、Bax上调，同时Bcl一2／Bax的比值降低f尸均<0．01)。Bcl．2与Bax阳性细胞主要分布于血管内皮细胞、肺泡上皮细胞及支气管上皮细胞。5．RT．PCR检测肺组织Bcl．2、BaxmRNA显示：在C组Bcl一2mRNA呈高水平表达