资源描述：
《蛋白质组检测技术进展》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、国外医学卫生学分册2004年第31卷第1期·55·[21]WattiezR,etal.[J].Electrophoresis,2000,21[25]BarbaraM,etal.[J].Electrophoresis,2002,(13):270322712.23:343423444.[22]Sabounchi2SchuttF,etal.[J].Electrophoresis,[26]LindahlM,etal.[J].Thorax,1996,51:102822001,22:185121860.1035.[23]Noèl2GeorisI,etal.[J].JChrom
2、atogrB,[27]PetrekM,etal.[J].Biomarkers,2002,7:5822002,771:2212236.67.[24]McCormackFX,etal.[J].AmJRespirCrit[28]vonBredowC,etal.[J].EurRespirJ,2001,CareMed,1995,152:7512759.17:7162722.012蛋白质组检测技术进展姜楠,霍海如,姜廷良综述(中国中医研究院中药研究所唐氏中药研究中心,北京100700)摘要:“蛋白质组学”概念自1994年提出之后,其研究技术得到了突飞猛进的发展,主要采用的是双
3、向凝胶电泳,但该方法存在很多不足,尤其在蛋白质的检测手段和定量分析上还不尽如人意。目前广泛使用的染色技术是银染和考马斯亮蓝染色,荧光染色等更准确和灵敏的检测技术也为蛋白质组学技术提供了不可比拟的技术支持。差异凝胶电泳和同位素代码标记的出现,对以双向电泳为核心的传统方法提出了创新和改进,新产生的多元化的分析方法将大大加强目前双向凝胶电泳的应用能力,促进其解决更多的基础问题。关键词:蛋白质组;双向电泳;检测技术中图分类号:R115文献标识码:A文章编号:100121226(2004)0120055204蛋白质组(proteome)这一概念是由澳大蛋白和难溶的膜蛋白及大
4、分子量、低丰度蛋[1]利亚学者Wilkins等于1994年提出,指的白也都不能被检测到,使得在其后的分析中[2]是由一个细胞或一个组织的基因组所表达的忽略了这些蛋白点;4)一张胶上最多只能全部相应的蛋白质。在蛋白质组学研究领域检测到3000个左右的蛋白点,很多蛋白可能主要使用双向凝胶电泳(2D)和质谱来进行共同移到了一个点上,造成了定量和质谱分蛋白质的分离和鉴定,双相凝胶电泳目前使析的准确性降低。双向电泳后对蛋白质的筛用最为广泛,第一相为等电聚焦,根据蛋白质选和定量分析也一直没有理想的技术和方等电点的不同进行分离,第二相为SDS2聚丙法,主要原因在于双向电泳的重复
5、性差。例烯酰胺凝胶电泳(SDS2PAGE),根据分子量的如,在凝胶图像分析中,蛋白点的边界难以确不同进行分离。通过该项技术可以得到关于定,胶与胶之间的背景值和点的强度都需要等电点、分子量、相对丰度、蛋白质同功型、修均化来消除胶之间的差异,而且匹配时也会[3]饰、亚细胞位置、蛋白质相互作用等信息。但有很多难以避免的误差。而且由于双向电该技术仍有很多不足,如:1)操作步骤自动化泳技术越来越多地用于分离目的蛋白进行质程度低;2)重复性差;3)等电点较大(大于9)谱分析,所以人们希望得到与质谱技术相融或较小(小于4)的点不易得到分离,疏水的合的蛋白质显色技术。所以,除了要
6、求显色方法的灵敏度、线性和重复性要好,还要求它能与现代的蛋白质组学分析技术衔接完好。收稿日期:2003208222;修回日期:2003211221基金项目:国家自然科学基金重大研究计划(90209006)目前常用于蛋白质检测的技术包括有机染料作者简介:姜楠(19792),女,硕士研究生,研究方向:中药药理染色、银染、放射同位素标记、负染、荧光染色学。等方法。两种新近出现的相差显示蛋白质组·56·国外医学卫生学分册2004年第31卷第1期学方法(differentialdisplayproteomics),如差异费用于检测、货存管理和实验人员的培训。凝胶电泳(dif
7、ferencegelelectrophoresis,DIGE)还有很多文献报道了关于在SDS2PAGE和同位素代码标记(isotopecodedaffinitytags,胶上使用负染的方法,包括使用氯化钾、氯化ICAT),对以双向电泳为核心的传统方法进行铜、氯化锌、乙酸钴、氯化镍和锌2咪唑等。目了改进,它们正在得到进一步的应用和研究。前3种最常用的负染方法是使用氯化钾、氯化铜和氯化锌。其中,氯化铜的染色灵敏度1传统的检测方法略高,氯化钾的灵敏度则远低于考马斯亮蓝传统的考马斯亮染技术由于其较低的成染色法。氯化锌法是目前灵敏度最高的负染[7]本、使用方便和与下游的蛋白
8、质鉴定技术
