微卫星不稳定与BRAF基因在结直肠癌中的表达及与预后的相关性研究.pdf

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1、分类号：R735.2密级：公开学校代码：11065学号：y0115130082专业博士学位论文微卫星不稳定与BRAF基因在结直肠癌中的表达及与预后的相关性研究作者姓名王宝磊指导教师卢云教授专业领域肝胆血管外科培养单位医学部临床医学系答辩日期2018年5月16日微卫星不稳定与BRAF基因在结直肠癌中的表达及与预后的相关性研究摘要目的：结直肠癌(colorectalcarcinoma，CRC)是临床上最常见的消化道肿瘤之一。在世界范围来看，我国虽然是结直肠癌的低发病区域，但随着国人饮食结构及生活习惯的不断改变，发病率呈现逐

2、年上升的趋势。美国癌症联合委员会（AmericanJointCommitteeonCancer，AJCC）推荐结直肠癌TNM分期已成为判断结直肠癌患者治疗和预后的金标准，但通过临床调研发现：相同TNM分期的不同患者，即使接受相同的治疗方案，仍具有显著不同的临床预后。虽然AJCC近年来通过不断细化结直肠癌TNM分期不同亚型来提高预后判断的准确性，但仍不能与临床实际情况完全符合，难以完全满足临床工作的需要。临床仍会出现部分Ⅲ期结直肠癌患者的预后好于Ⅱ期患者的情况。因此，亟待界定一种或几种与结直肠肿瘤相关标记物来扩充TNM分

3、期对结直肠癌患者预后判断的不足。近年来，随着分子生物技术和分子遗传学的不断发展，一些最新研究提示某些分子标记物（如微卫星不稳定性MSI、v-Ki-ras2Kirsten大鼠肉瘤病毒癌基因同源物KRAS及v-raf鼠肉瘤病毒癌基因同源物B1BRAF-V600E突变等）可较准确预测结直肠癌患者的治疗反应和预后。本文旨在进一步研究结直肠癌患者的微卫星不稳定状态（MSI）及BRAF基因突变对结直肠癌患者预后的影响，同时分析各项临床指标对预后的影响，筛选影响患者预后的独立影响因素，探讨微卫星不稳定与BRAF突变之间的联系。分别探

4、讨微卫星不稳定状态、BRAF突变与结直肠癌临床病理之间的联系。方法：1、流行病学方法：①从青岛大学附属医院病历科研数据系统，按照事先研究确定的检索条件，筛选出从2011年3月至2017年3月行根治性手术治疗（R0切除，包括转移灶的完整切除）并经术后病理证实的6904例结直肠患者的病历数据资料进行分析以探讨其临床病理特征，临床资料包括：性别、发病年龄、肿瘤部位、临床病理类型、肿瘤浸润深度、淋巴结转移情况、TNM分期、免疫组化（MLH1、PMS2、MSH2、MSH6）表达等。②设定病例纳入及排除标准，对从2011年3月至2

5、012年3月在我科行手术治疗的430例结直肠患者进行回顾性电话随访，随访前通过病历信息系统收集患者临床资料（同1），观察其无病生存期（根治性手术治疗到肿瘤复发或因复发死亡，DiseaseFreeSurvival，DFS），最终390例患者的预后信息得到有效应答（随访率90.7%）。回顾性随访时间截至2017年8月，在2017年8月前出现结直肠癌复发或因复发死亡视为I结局，仍未出现复发或者死于其他疾病视为截尾。2、实验方法：①以免疫组织化学法检测结直肠癌患者肿瘤组织中错配修复蛋白（MLH1、PMS2、MSH2、MSH6）

6、表达缺失情况。4个错配修复蛋白均呈阳性表达者即为微卫星稳定(microsatellitestability，MSS)；出现1个及以上阴性表达者为微卫星不稳定（microsatelliteinstability，MSI）。②另行收集130例结直肠癌患者术后新鲜或解冻的肿瘤标本，应用定量实时荧光PCR（quantitativereal-timePCR，qPCR）检测BRAF基因在结直肠癌患者中的表达情况。3、统计学方法：①临床病理资料：定性资料以频数表示，采用卡方检验或秩和检验；定量资料以均数±标准差表示，采用t检验或方差

7、分析，若组间方差齐，进一步两两比较采用LSD法，若组间方差不齐，则进一步两两比较采用Tamhane法；相关性分析采用peason相关或spearman秩相关。②随访资料：采用Kaplan-Meier法进行单因素生存分析，进而采用Cox比例风险回归模型进行多因素生存分析，最终确定结直肠癌患者预后的独立影响因素,以危险度（RiskRatio，RR）反映各影响因素对术后DFS的影响程度，并给出RR的95%置信区间（ConfidentialInterval，CI）。所有分析均在SPSS18.0软件中完成，以P＜0.05表示差异

8、具有统计学意义。结果：1.病历库患者与随访患者情况比较：所有6904例结直肠癌患者中MLH1阴性者1159例（16.79%），MSH2阴性者1153例（16.70%），MSH6阴性者1158例（16.77%），PMS2阴性者1159例（16.78%）。被随访390例结直肠癌患者中MLH1阴性者65例（16.70%），MSH2阴性者