金鱼Tgf2转座元件的转座效率研究及团头鲂HIF3α基因的低氧诱导表达分析.pdf

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1、上海海洋大学硕士学位论文学校代码：10264研究生学号：M150107159上海海洋大学硕士学位论文题目：金鱼Tgf2转座元件的转座效率研究及团头鲂HIF3α基因的低氧诱导表达分析StudyonGoldfishTgf2transposontransposition英文题目：efficiencyandhypoxia-inducedexpressionanalysisofHIF3αgeneinMegalobramaamblycephala专业：动物遗传育种与繁殖研究方向：鱼类种质资源遗传育种姓名：刘子茵指导教师：邹曙明教授二0一八年五月二十五日上海海洋大学硕士学位论文上海

2、海洋大学学位论文原创性声明本人郑重声明：我恪守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经明确注明和引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日上海海洋大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权上海海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编

3、入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本版权书。本学位论文属于不保密□学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日上海海洋大学硕士学位论文上海海洋大学硕士学位论文答辩委员会成员名单姓名工作单位职称备注赵云龙华东师范大学教授主席王群华东师范大学教授委员江赐忠同济大学教授委员程起群东海水产研究所研究员委员沈玉帮上海海洋大学副教授委员陈杰上海海洋大学讲师秘书2018年5月28日答辩地点图文信息中心512答辩日期下午13：00时上海海洋大学硕士学位论文金鱼Tgf2转座元件的转座效率研究及团头鲂HIF3α

4、基因的低氧诱导表达分析摘要转座子(Transposon)，可在基因组上自由跳跃（复制或者移位）的一类DNA片段，其移动的过程被称为转座(Transposition)。包括I类逆转录转座子和II类DNA转座子。转座子的插入诱变研究在包括鱼类等动物的性状主要调控基因的选择方面、功能探索以及转基因等多个研究方面开展研究具有极大的潜力。本实验中的主要研究对象Tgf2转座子，是由本实验室研究发现的具备自主转座活性的DNA转座元件。本研究着重于提高该转座酶蛋白的入核效率进而提高Tgf2转座效率进行探讨，目的是人工干涉转座元件来提高转座效率，为外源基因整合并稳定表达建立理论基础，为

5、鱼类插入诱变研究提供支持。我们构建了包含有Tgf2转座酶蛋白的pEGFP-Tgf2TP表达载体，及含有猿猴病毒40(Simianvirus40,SV40)大T抗原核定位信号(Nuclearlocalizationsequence,NLS)的pEGFP-TP-SV40NLS转座酶质粒，来研究人工干涉转座元件能否提高入核效率及转座效率。将构建的转座酶质粒经共显微注射导入斑马鱼受精卵中，经体外培养后在胚胎发育不同时期用观察检测报告基因绿色荧光蛋白，并通过测序检测阳性率。低氧诱导因子(Hypoxia-induciblefactor,HIF)在低氧反应中发挥着重要作用，其活性受

6、到α亚基的调控。HIFs可以激活其下游对低I上海海洋大学硕士学位论文氧敏感的一系列基因进行转录，从而调控包括能量代谢、红细胞生成、血管形成、细胞的增殖和凋亡在内的多种生理过程，以保证有机体在低氧环境下的稳态。目前关于HIF1α和HIF2α的在人、哺乳动物及鱼类中的研究较为深入，但对HIF3α的结构特点及其在低氧情况下的调控机制研究较少。我们希望通过探究团头鲂(Megalobramaamblycephala)HIF3α的结构及其低氧功能来探索出其不耐低氧的调控机制，进而为以后培育耐低氧团头鲂新品系服务。为此我们构建了包含有团头鲂HIF3α基因的表达载体pCS2-HIF3

7、α-EGFP，来研究HIF3α蛋白在常氧和低氧的核定位分布情况，并通过检测团头鲂HIF3α在蛋白水平的表达情况，以期寻找其低氧调控机理，为团头鲂耐低氧研究提供理论基础。我们的研究结果如下：(1)通过将pEGFP-Tgf2TP和pEGFP-TP-SV40NLS转座酶质粒分别转染进入HeLa细胞，我们发现pEGFP-Tgf2TP-SV40NLS重组转座酶蛋白的绿色荧光多集中于细胞核分布，与瞬时转染pEGFP-Tgf2TP转座酶质粒的对照组细胞比较，入核效率达到51.63%，比对照组提高了11.58%，说明SV40NLS可以帮助提高入核效率。显微注射pEG