新西兰黑金鲍(Haliotis iris)外套膜与腹足部黑色性状的初步研究.pdf

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1、上海海洋大学硕士学位论文学校代码：10264研究生学号：M150150253上海海洋大学硕士学位论文新西兰黑金鲍（Haliotisiris）外套膜与腹题目：足部黑色性状的初步研究PreliminaryResearchofBlackMantleand英文题目：MuscleoftheNewZealandHaliotisiris专业：渔业研究方向：海洋贝类学姓名：郝世鑫王晓通教授指导教师：郭文研究员二O一八年五月十八日I上海海洋大学硕士学位论文II上海海洋大学硕士学位论文上海海洋大学硕士学位论文答辩委员会成员名单姓名工作单位职称备注孙卫明

2、烟台大学教授主席刘永胜烟台市水产研究所研究员委员姜海滨山东省海洋资源与环境研究院教授委员张超山东省海洋资源与环境研究院秘书答辩地点山东省海洋资源与环境研究院答辩日期2018-5-18二楼会议室III上海海洋大学硕士学位论文新西兰黑金鲍（Haliotisiris）外套膜与腹足部黑色性状的初步研究摘要新西兰黑金鲍（Haliotisiris），属软体动物门（Mollusca）,，腹足纲（Gastropoda），前鳃亚纲（Prosobranchia），原始腹足目（Archaeogastropoda），鲍科（Haliotidae）。鉴于国内鲍

3、类产业出现的种种问题，需要引进或培育新鲍种，黑金鲍体积比较大，营养价值丰富，且具有独特的外形特征，其软体部表面覆有一层黑膜，与其余鲍类存在显著的差异。在前人的研究基础上，本实验继续对黑金鲍进行了多方面的研究:首先，从黑金鲍外套膜与腹足部提取黑色物质，确定是否为黑色素这一物质；然后以转录组测序技术对黑金鲍和皱纹盘鲍的腹足与外套膜组织进行研究，对比分析两种鲍存在性状差异的基因层面的原因，得到结果如下：一、黑色物质提取鉴定分别取黑金鲍覆有黑色物质的外套膜与腹足部的表层共两份样品，经切碎、盐酸浸泡水解、沸水浴、抽滤、脱脂与干燥等步骤后，获得

4、两份黑色物质样品。对所得样品进行紫外光谱与红外光谱的鉴定，结果显示两份样品均具有相同的光谱特性：在紫外波长下存在明显吸收特征，并有最大吸收峰，其最大值在210-220nm处，并且随着波长的增加，其吸光值也下降，与经典的黑色素紫外扫描图谱一致；红外光谱特征吸收峰主要集中在以下三组峰：3400~3200cm-1、1520~1620cm-1和1250~1100cm-1，其中3269cm-1处强吸收峰是由O—H和吲哚的N—H伸缩振动产生的，1620cm-1处吸收峰属于黑色素典型的苯醌类结构,1526cm-1处的吸收峰推测有黑色素典型的吲哚结

5、构,另外2923cm-1处的吸收提示黑金鲍软体部中黑色素含有脂肪族结构。由以上实验结果可知，从黑金鲍软体部提取的黑色物质为真黑色素。二、转录组测序筛选基因为了研究黑金鲍软体部独特的黑色性状与其他鲍类基因层面的差异，本研究以3只黑金鲍和3只皱纹盘鲍为研究材料，分别取外套膜与腹足部两种组织作为样品，使用转录组测序技术（IlluminaHiseqTM2500），对来自黑金鲍与皱纹盘鲍的样品进行基因转录组测序组装。本次测序共计获得517192821条cleanreads，199359条Unigene，平均长度为1017.44kb，然后通过G

6、O、NR、KEGG和Swiss-ProtIV上海海洋大学硕士学位论文四大数据库对获得的Unigene进行相关基因的筛选与功能注释，在黑金鲍-皱纹盘鲍外套膜组共得到690个GOTerm，10个pathway；在黑金鲍-皱纹盘鲍腹足组共计得到1409个GOTerm，29个pathway，且根据GO与KEGG通路信息的富集分析，查找与黑色素合成代谢相关的信息，最终筛选出四个目的基因，基因序列编码为：comp134829_c0_seq2_1、comp122073_c0_seq1_2、comp107296_c0_seq1_1、comp1222

7、78_c0_seq1_1。三、荧光定量PCR对转录组中提取的12份RNA进行测试，然后转录成cDNA，并设计引物进行荧光定量实验。实验结果表明，引物扩增效率在88％〜100.5％之间，扩增效果好，可进行荧光定量实验。最终从定量结果与转录组结果比对得到在皱膜-黑膜比较组，comp134829和comp122073定量PCR的结果一致，comp134829与comp122073在所取样品中的定量结果均和转录组测序结果吻合；皱足-黑足比较组，只有comp122073在样品中荧光定量结果与转录组测序的结果吻合。关键词：新西兰黑金鲍，黑色素，

8、转录组测序，荧光定量PCRV上海海洋大学硕士学位论文PreliminaryResearchofBlackMantleandMuscleoftheNewZealandHaliotisirisABSTRACTNewZealand'sHal