皱纹盘鲍（haliotis discus hannai）外套膜耐维生素e缺乏消减cdna文库的构建及相关基因的克隆

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1、中国海洋大学硕士学位论文皱纹盘鲍（Haliotisdiscushannai）外套膜耐维生素E缺乏消减cDNA文库的构建及相关基因的克隆姓名：刘晶申请学位级别：硕士专业：水生生物学指导教师：麦康森20070601皱纹盘鲍(Haliotisdiscushannai)外套膜耐维生素E缺乏消减cDNA文库的构建及相关基因的克隆中文摘要本文利用抑制消减杂交技术(suppressionsubtractivehybridization，SSH)来构建消减文库的方法，克隆维生素E缺乏时皱纹盘鲍(Haliotisdiscushannai)外套膜差异性表达的基因。我们选取了片段大小不同的48

2、个克隆测序，其中有16个新基因，10个谷胱甘肽转移酶的基因，5个谷胱甘肽过氧化物酶基因，2个过氧化氢酶基因，3个羟基类固醇脱氢酶基因，4个酪氨酸激酶基因，1个类甲状腺过氧化物酶蛋白基因，3个纤维素酶基因，1个cAMP效应元件结合蛋白基因，3个贝壳生物矿化相关蛋白的基因。并在此基础上，对外套膜消减文库中所得到的与过氧化酶相关的两个基因，类纤维素基因、类钙结合蛋白基因以及两个贝壳蛋白基因的片段，利用RACE技术获得了与过氧化酶相关的两个基因和类钙结合蛋白基因的全长，并获得了类纤维素基因的5’产物和两个贝壳蛋白基因的3’产物，为迸一步研究这些基因在不同维生素水平和不同组织中的表

3、达情况奠定了基础。关键词：皱纹盘鲍；外套膜；维生素E；基因表达；抑制消减杂交；eDNA文库；RACEConstructionofthemantleeDNAsubtractivelibraryofHaliotisdiscushannaiInofedwithVitaminE-deficiencymetandcloningofthefuHlengthoftherelatedgenesAbstractThisarticle翻．1】：Ilmarizedthetechnologiespolymerasechainreaction(PCR)andnucleicacidhybridiza

4、tioninthefieldofnutritionandgeneexpressionofaquaticanimals)anditsproductions．Inaddition，wemadetheforegroundonthedevelopmentofnutritionandgeneexpressionofaquaticanimals．Wesuggesttousesuppressionsubtractivehybridization(SS}DtocloningthedifferentiallyexpressedgenesinthemantleofabaloneHalioti

5、sdiscushannaiduringvitaminEdeficiency．Juvenileabalone(initialweight：0．71士0．00g；initialshelllength：15．49士0．04mm)werefed240dayswithserni'-purifieddietscontaining2levelsofvitaminE：3．5m眺gand52．8megkg．TheeDNAsubtractivelibraryofthemantleofabalonevitaminEdeficiency—treatedwasconstructedusingthe

6、methodofSSH．TheresultsshowedthattheconstructedeDNAsubtractivelibrarywasahighlyefficientone：thecDNAsweresignificantlyenrichedfordifferentiallyexpressedsequences．OnehundredpositivecloneswererandomlypickedandidentifiedbyPeRmethod，that95％clonescontained100～900bpinserts，theseinsertsmightbethec

7、DNAfragmentsofdifferentiallyexpressedgenesinthevitaminEdeficiencygroup．Fortyeightclonesweresequenced，including16new7genes，10glutathione-s-transferasegenes，5glutathioneperoxidasegenes，2catalasegenes，3hydroxysteroiddehydrogenasegenes，4tyrosinekinasegenes，1thyroidperox