半滑舌鳎视黄酸受体克隆及其对无眼侧黑化的调控作用研究.pdf

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1、学校代码：10264研究生学号：M150150263上海海洋大学硕士学位论文半滑舌鳎视黄酸受体克隆及其对无题目：眼侧黑化的调控作用研究Cloning,expressionpatternsandphysiologicalrolesoftworetinoicacid英文题目：receptorsinblindsidehypermelanosisinCynoglossussemilaevis专业：渔业研究方向：半滑舌鳎无眼侧黑化分子机制研究姓名：宋雪松指导教师：柳学周研究员二O一八年四月五日上海海洋大学硕士学位论文上海海洋大学学位论文原创性声明本人郑重声明：我恪守

2、学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经明确注明和引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日上海海洋大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权上海海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印

3、、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本版权书。本学位论文属于不保密□学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日上海海洋大学硕士学位论文上海海洋大学硕士学位论文答辩委员会成员名单姓名工作单位职称备注答辩答辩地点时间上海海洋大学硕士学位论文半滑舌鳎视黄酸受体克隆及其对无眼侧黑化的调控作用研究Cloning,expressionpatternsandphysiologicalrolesoftworetinoicacidreceptorsinblindsidehypermelanosisinCynoglossussemi

4、laevis学位论文完成日期：指导教师签字：答辩委员会成员签字：上海海洋大学硕士学位论文半滑舌鳎视黄酸受体克隆及其对无眼侧黑化的调控作用研究摘要本研究以我国鲆鲽类主导养殖品种—半滑舌鳎(Cynoglossussemilaevis)为研究对象，克隆了两种视黄酸受体RARα和RARγ，分析了其基因结构，探究了RAR基因在皮肤等各个组织中的表达情况，揭示了其与黑色素数量分布的关系。查明了半滑舌鳎胚胎发育和仔稚幼鱼生长发育阶段两种视黄酸受体的发育模式及其表达调控特征，探明了半滑舌鳎幼鱼中两种视黄酸受体对不同光照强度的应答机制，分析了其与其它体色相关功能基因POMC

5、a、POMCb,MCH1、MCH2等基因的表达调控的关系为深入认识半滑舌鳎无眼侧黑化调控机制提供了基础资料。主要研究结果如下：1.半滑舌鳎RARα和RARγ克隆及组织表达特性利用RT-PCR和RACE方法获得了半滑舌鳎2种视黄酸受体RARα和RARγ的cDNA全长序列，并采用定量PCR技术分析了其组织表达特性。半滑舌鳎RARαcDNA序列全长为1823bp，编码443个氨基酸；RARγcDNA序列全长为1959bp，编码489个氨基酸。同源性分析显示半滑舌鳎RARα和RARγ同源性高达60.8%，与牙鲆同源性高达97.0%，具有较强的进化保守性。系统进化分

6、析显示半滑舌鳎RARα和RARγ分别归属于单独的分支，且与其它鱼类聚合成簇。组织表达分析显示，RARαmRNA在肾中表达量最高，而RARγmRNA在脾中表达量最高，RARα和RARγmRNA在其他组织中均检测到表达，表明半滑舌鳎两种RAR都可能参与多种生理过程调控。半滑舌鳎两种RARmRNA在有眼侧皮肤、无眼侧黑化皮肤和无眼侧正常皮肤中的表达量依次升高，且发现RARα在正常有眼侧皮肤的表达高于RARγ，而RARγ在无眼侧正常皮肤中的表达显著高于RARα，无眼侧黑化皮肤中RARα表达高于RARγ。RAR基因在有眼侧和无眼侧皮肤组织中的差异表达可能和RA/RA

7、R系统调节体色有关。2.半滑舌鳎两种视黄酸受体在早期生长发育阶段的表达调控特性为深入认识半滑舌鳎RA/RAR信号系统在早期生长发育阶段的表达特性及调控作用，查明了两种视黄酸受体RARα和RARγ在配子、胚胎发育和仔稚幼鱼生I上海海洋大学硕士学位论文长发育阶段的时空表达特征，并揭示了其与4种体色相关因子表达调控的关系。半滑舌鳎RARα和RARγ都具有母源或父源遗传的特性。在胚胎发育阶段，这两个基因在原肠胚期之前表达水平均较低，但在胚体包被卵黄囊1/2时显著升高，但在孵化出膜期又下降至胚体包被卵黄囊1/2时同等水平，这些结果表明RARα与RARγ均参与了半滑舌

8、鳎胚胎发育过程中胚体形成、器官发育的调控。在仔稚幼鱼阶段，RARα