p38γ在人脑星形细胞瘤中的表达及生物学意义的研究

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1、万方数据中图分类号UDC博士学位论文学校代码密级10533p38y在人脑星形细胞瘤中的表达及生物学意义的研究lneresearCneSOnexpressionandblolOKlCalSllZmtlcancer”11●'●'●●一ofp387inhumanastrocyticgliomas作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：论文答辩日期!．!!三：：j’¨杨魁临床医学神经外科学湘雅医院刘运生教授7答辩委员会主席一中南大学2013年6月万方数据学位论文原创性声明【IIIIIIIIIIIIIILLIIILIIILIlUlHIIIIY2685135本人

2、郑重声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。作者签名：二埠日期：鲨4≥年丛月耳日学位论文版权使用授权书本学位论文作者和指导教师完全了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定：即学校有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版；本人允许本学位论文被查阅和

3、借阅；学校可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用复印、缩印或其它手段保存和汇编本学位论文。保密论文待解密后适应本声明。作者签名：监导师签名日期：4年』月斗日日期：型L年丛月斗日万方数据博士学位论文中文摘要p38y在人脑星形细胞瘤中的表达及生物学意义的研究摘要背景：作为最常见的神经上皮性肿瘤，星形细胞瘤通常具有无限增殖和侵袭性生长的特点，尽管目前已有多种治疗手段，但该病的整体预后仍欠佳，因而仍有必要深入研究其肿瘤发生发展的分子机制以寻找新的有效治疗靶点。p38y是p38MAPK(丝裂原活化蛋白激酶)的四个亚型之一，正常情况下仅表达于骨骼肌组织

4、。近年来的一些研究发现p387可能参与一些潜在的细胞恶性转化的调节过程，表明其在肿瘤的发生和进展过程中潜在的致瘤性，但具体作用机制仍然不明。目前国内外尚未有研究揭示p387在人脑星形细胞瘤组织中的表达情况及其对肿瘤生物学行为的影响。目的：探讨p38y在人脑星形细胞瘤组织中的表达情况及与各项临床病理指标的关系。构建沉默人p38y基因表达的siRNA序列并筛选出有效siRNA序列，为后续体外实验研究p387的生物学功能提供基础。探讨p387对胶质瘤细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭等多种生物学特性的影响及相关的作用机制。方法：标准化采集61例人星形细胞瘤和5例非肿瘤性脑组织标本

5、，分别用Westernblot及免疫组化法检测前述标本中p38y和hTERT蛋白的表达差异，分析p38y表达水平与星形细胞瘤患者各项临床病理指标的关系。设计针对p387的siRNA片段(3对)，借助LipofectamineTM2000转染入人胶质瘤U251细胞，使用荧光定量RealIT万方数据博士学位论文中文摘要time—PCR及Westernblot评价沉默效率，筛选出最有效的干扰序列用于后续实验。运用CCK．8、流式细胞术、Transwell实验等技术观察siRNA沉默p38y后U251细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭能力的变化。同时为研究前述变化的具体作用机制，检

6、测hTERT、MMP．2及MMP．9蛋白含量(westernblot)，端粒酶活性(TRAP．PCR银染法)，Caspase．3／-9酶活性(分光光度法)及细胞骨架形态(免疫荧光染色)。结果：1．与非肿瘤性脑组织相比，星形细胞瘤中p387蛋白的表达明显升高，且在高级别星形细胞瘤中表达量高于低级别星形细胞瘤(PO．05)。2．Realtime．PCR和westernblot分析显示，三组p387-siRNA干扰序列转

7、染U251细胞后，p38ymRNA和蛋白表达均受到抑制(P