mir-183在子宫内膜癌ishikawa细胞中的表达及其对p535蛋白的调节作用

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1、目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4研究论文miR-183在子宫内膜癌Ishikawa细胞中的表达及其对p53蛋白的调节作用前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8月IJ吾⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．8材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯9结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．21匀日：刁≮⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、．．么l附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．24附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．28讨{仑⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．30结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．33参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．34综述miR一183家族在肿瘤中的研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯37致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．45个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．

3、46中文摘要中父捅要miR．183在子宫内膜癌Ishikawa细胞中的表达及其对p53蛋白的调节作用摘要目的：子宫内膜癌(EndometrialCarcinoma)是女性生殖系统常见肿瘤之一，占女性生殖道恶性肿瘤的20％．30％。近年来子宫内膜癌的发生率在全球呈上升趋势，并且发病年龄也逐渐年轻化，严重影响着广大女性的健康和生命。对子宫内膜癌发生、发展机制的探讨一直都是广大学者们的研究热点，随着分子生物学技术的发展，研究者们发现与人类肿瘤关系密切的p53基因可能是子宫内膜癌发生、发展的重要基因，正常p53基因的缺失或突变可导致细

4、胞的无限生长，并认为p53基因的突变是肿瘤发生的一个早期事件，目前研究发现在人类恶性肿瘤中至少有50％发生了p53基因的变化，而在几乎所有的人类肿瘤中均存在p53信号通路的异常【11。在己证实多种肿瘤中存在p53蛋白异常表达研究的基础上，Berchuka等【2】人的研究发现在正常子宫内膜及不典型增生的子宫内膜组织中没有p53蛋白的表达，同时在他们的研究中也证实p53蛋白的表达可以间接反应p53基因的突变。大量研究虽已证实p53蛋白与子宫内膜癌的发展与预后密切相关，但其在子宫内膜癌中的作用机制及影响其在子宫内膜癌中表达的原因仍不

5、明了。近年来在分子生物学研究中发现miRNAs参与了TP53(编码p53蛋白)的信号传导通路，并认为它们之间存在着错综复杂的调控网络，miR-183家族是定位于7号染色体，包括miR-183、miR-182、miR-96三种miRNAs，在妇科肿瘤及其他多种肿瘤中存在异常表达，它们通过调控肿瘤细胞分裂与凋亡的相关基因参与肿瘤的发生、发展。Ishikawa细胞株是一种分化良好、ER受体阳性的子宫内膜癌细胞系，本实验旨在探讨子宫内膜癌Ishikawa细胞中miR-183的表达状况及其对p53蛋白表达和细胞增殖、凋亡的影响，为探讨子

6、宫内膜癌的发生、发展机制和临床诊断、判断预后提供新的研究方向和理论依据。方法：1培养子宫内膜癌Ishikawa细胞株。2分组：(1)采用LipofectaminerM2000脂质体转染试剂，实验组转染中文摘要miR-183的特异性抑制剂反义寡核苷酸；(2)阴性对照组转染无关miR-183的特异性抑制剂核苷酸序列；(3)脂质体对照组转染Lipofectamine瑚2000脂质体转染试剂；(4)空白对照组不转染。3CCK．8法检测各组子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖情况。4流式细胞学方法检测各组子宫内膜癌Ishikawa细胞凋亡

7、情况。5实时RT-PCR检测各组子宫内膜癌Ishikawa细胞中miR-183和p53mRNA的表达水平。6Westernblot检测各组子宫内膜癌Ishikawa细胞中p53蛋白表达。7统计方法：用spssl3．0统计软件，检测数据以均数4-标准差(i士s')表示，两组间均数比较用t检验，正态、方差齐的多组间均数比较采用单因素方差分析，以P<0．05为具有显著性，所有实验均重复3次。结果：lCCK．8实验：O一24小时，实验组、空白对照组、脂质体对照组增速相似，阴性对照组略快；24-48小时实验组、空白对照组和脂质体对照组增

8、速较快；48．72小时，转染48小时后，实验组细胞较其它各组细胞增长速度较快；72．96小时，四组细胞继续保持增长状态，且达到对数生长期，实验组细胞较其它各组细胞增长速度较快。2FITC／PI双染流式细胞学法：细胞转染3天后，实验组较其他各组早期凋亡率降低明显，与各组问比较有