loh12cr1与thrsp相互作用的鉴定

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1、中图分类号B三2UDC610硕士学位论文学校代码!Q§3兰密级公珏LOHl2CRl与THRSP相互作用的鉴定IdentificationTHRSPastheinteractiveproteinofLOHl2CRl作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系所)：指导教师：杨倩内科学消化系肿瘤中南大学湘雅二医院施小六教授论文答辩Et期出!媪皇虚盘B答辩委员会主席中南大学二。一三年五月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特另tlDi：l以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其

2、他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：垒垡日期：也马年—丘月』三日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名：—龃导师签笤幺童三1日期：丛年三月二筇亟±堂僮途塞生塞擅要摘要LOHl2CRl与THRSP相互作

3、用的鉴定前言：LOHl2CRl是抑瘤蛋白LKBl的互作蛋白，其具体作用机制尚不明确。THRSP／Spotl4是2011年本课题组初步筛选出LOHl2CRl的互作蛋白，人Spotl4蛋白主要在脂肪生成组织中表达，被认为是脂肪生成必须的蛋白，，且在乳腺癌中经常是高量表达。目的：验证LOHl2CRl与THRSP是否存在真正的蛋白质互作关系，为LOHl2CRl的功能研究提供新的方向。方法：本研究将构建的pcDNATM3．1／myc—His．LOHl2CR和pCMV-ta92B—THRSP重组质粒共同转染HEK293细胞，通过免疫共沉淀技术验证二者在细胞内的相互作用，通过激光共聚焦技术观察二者在H

4、EK293细胞内的免疫荧光亚细胞水平共定位情况。结果：1、经免疫共沉淀正反双向实验证实了实验所构建的载体正确，在细胞内均有表达，分子量大小合适，从而证实了THRSP与LOHl2CRl在细胞内存在相互作用；2、经免疫荧光实验及激光共聚焦检测到TttRSP主要定位于胞浆中，而LOHl2CRl在胞浆、胞核中均有分布，LOHl2CRl与THRSP存在亚细胞共定位，且主要共定位于胞浆。结论：本研究证实了THRSP／Spotl4与LOHl2CRl在细胞内存在相互作用的关系，目前已知THRSP／Spotl4主要生物学功能为脂肪合成所必需的蛋白且在某些肿瘤(特别是乳腺癌)中有高表达，从而提示了LOHl2

5、CRl可能从脂代谢方面参与了肥胖和肿瘤(特别是乳腺癌)的发生发展，这些假设我们将在后续的研究中加以验证。关键词：STKl1／LKB1；LOHl2CRl；THRSP／Spotl4；蛋白互作亟±堂焦途塞虫塞擅蔓分类号：R57亟±堂焦论塞墓窒擅要IdentificationTHRSPastheinteractiveproteinofAbsrtactLOHl2CRlPreface：LOH12CRl，identifiedonchromosome12，isextremelyconservitiveinevolution．Itsbiologicalfunctionisnotclear．Ourrease

6、rchgroupalsohadscreenedtheThyroidhormoneresponsiveprotein(THRSP,alsoknownasSpot14andS14)，asaninteractiveproteinofLOH12CRl．TheSpot14geneencodesaproteinthatispredominantlyexpressedinlipogenictissues．whichis行equentlyamplifiedinbreasttumours，andasaresult，ithasbeensuggestedthatthisproteincouldbeplayin

7、garoleinthemetabolismandgrowthofthesekindsoftumours．Objective：OurreasercheswillprovewhethertheTHRSPactuallyinteractswithLOHl2CRl，andthenprovidesaneworientationforthestudyofLOHl2CRl．Methods：Co—transfectedHEK293cellwithp