小麦结题论文doc - 山东农业大学

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1、小麦根系中微生物的研究08级生物科学2班杨静红摘要本实验对小麦根系中的微生物进行了深入研究，利用稀释涂布法培养菌种，通过划线、涂布、点接等实验方法分离纯化菌种，最终得到单菌落，建立菌种资源库。同时，利用革兰氏染色鉴别菌种，并对微生物的拮抗作机理做了初步探索。本课题主要研究成果如下：保存斜面菌种67株，熏制并保存菌种94株（其中放线菌19种，霉菌27种，细菌48种）。关键词：小麦根系微生物分离纯化保藏菌种档案第一章绪论1.1课题研究的原理及意义土壤具有绝大多数微生物生活所需的各种条件，是自然界微生物生长繁殖的良好基地。其原因在于土壤含有丰富的动植物和微生物残体，可供微生物作为碳源、氮源、能源

2、和生长因子。土壤含有大量而全面的矿质元素，供微生物生命活动所需。土壤中的水分都可满足微生物对水分的需求。不论通气条件如何，都可适宜某些微生物类群的生长。土壤中的通气状况变化时，生活其间的微生物各类群之间的相对数量也起变化。通气条件好可为好氧性微生物创造生活条件；通气条件差，处于厌氧状态时又成了厌氧性微生物发育的理想环境。土壤的pH值范围在3.50-10.00之间，多数在5.50-8.50之间。而大多数微生物的适宜生长pH也在这一范围。即使在较酸或较碱性的土壤中，也有较耐酸、喜酸或较耐碱、喜碱的微生物发育繁殖，各得其所地生活着。土壤温度变化幅度小而缓慢，这一特性极为有利于微生物的生长。如土壤

3、温度夏季比空气温度低，而冬季又比空气温度高。土壤的温度范围恰是中温性和低温性微生物生长的适宜范围。因此，土壤是微生物资源的巨大宝库，事实上，许多对人类有重大影响的微生物种大多是从土壤中分离获得的，如大多数产生抗生素的放线菌分离自土壤。1.2实验方法利用稀释涂布法分离菌种，并通过划线、涂布、点接等分离纯化菌种，最终得到单菌落，建立菌种资源库。第二章实验的材料及方法2.1材料2.1.1实验地概况该实验选在山东农业大学南校区小麦实验田（北纬36°09′，东经117°09′）。该区海拔高度125m，年平均气温13℃，年平均降水量697mm，属温带半湿润大陆性季风气候区。该实验地土壤类型为棕壤，肥力

4、中等。2.1.2仪器设备及药品2.1.2.1仪器设备ZDX-35RI型坐式自动电热压力蒸汽灭菌器、DNP-9162电热恒温培养箱、SR-1607F电加热板、RD23B-C电脑烧烤微波炉、AIR-TECH超净工作台、Haier冰箱、1/100g电子天平、涂布棒、移液枪、接种环等。2.1.2.2药品KNO3、K2HPO4、MgSO4、NaCl、FeSO4、牛肉膏、蛋白胨、马铃薯、蔗糖、酵母膏、可溶性淀粉、琼脂、结晶紫、碘液、95%乙醇、番红液、香柏油、二甲苯。2.2实验方法2.2.1培养基的制备LB和牛肉膏蛋白胨培养基用于细菌的培养，其中灭菌前LB培养基的pH7.0，牛肉膏蛋白胨培养基的pH在

5、7.0-7.2之间；PDA用于霉菌的培养，灭菌前pH自然；高氏1号培养基用于放线菌的培养，灭菌前pH在7.2-7.4之间。培养基成分培养基碳源氮源无机盐LB酵母膏5g蛋白胨10gNaCl10gPDA蔗糖20g马铃薯200g无K2HPO40.5gMgSO40.5g高氏1号培养基可溶性淀粉20gKNO30.5gNaCl0.5gFeSO40.01g牛肉膏蛋白胨牛肉膏3g蛋白胨10gNaCl5g在上述原料基础上，再分别加入15-20g琼脂和1000ml水置于5个250ml锥形瓶中，棉塞封口，用报纸包好，用高压灭菌锅在121℃下灭菌25min。2.2.2倒平板2.2.2.1培养基、培养皿、涂抹棒、枪

6、头、无菌水等置于高温灭菌锅121℃灭菌25min；超净工作台紫外线消毒20min。2.2.2.2将培养基、培养皿、涂抹棒、枪头、无菌水等移入超净工作台中。2.2.2.3将培养基倒入培养皿（培养皿1/3容积）中，在酒精灯火焰附近（火焰周围10cm左右）操作。2.2.2.4开盖至冷却，盖上皿盖。2.2.3小麦根系中菌种的提取——稀释涂布法2.2.3.1实验原料土壤样本10.00g、90ml无菌水（锥形瓶中）、9ml无菌水(试管)、培养皿2.2.3.2实验步骤2.2.3.2.1从实验田中采取生长状况良好的小麦根附近土壤（小麦根系下10cm）2.2.3.2.2电子天平准确称取10.00g土样，加入

7、到90ml无菌水中，振荡摇匀，酒精擦拭后移入超净工作台。2.2.3.2.3将试管依次编号1-6，用移液枪移取1000ul悬浊液置于1号试管，再移取1000ul1号试管悬浊液置于2号试管，依次做六个试管。2.2.3.2.4用移液枪分别取4、5、6号试管溶液各200ul（每个试管取2-4份）并做好标记（土壤采集地、操作人、溶液浓度级）。2.2.3.2.5用涂抹棒均匀涂抹培养基中的土壤溶液。（以上均在超净工作台酒精灯火焰附近操