her3激活诱导胃癌对拉帕替尼耐药的机制研究

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1、万方数据硕士论文硕士学位论文HER3激活诱导胃癌对拉帕替尼耐药的机制研究TheMechanismofHER3ActivationinGastricCancerResistancetoLapatinib院系：肿瘤医院专业：肿瘤学姓名：朱丹导师：张文副教授导师组成员：李进教授郭伟剑教授万方数据硕士论文目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3正文—1．￡．—j一日lJ吾⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5材料与方法⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯19讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯30参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯34文献综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯41致谢论文声明万方数据硕士论文中文摘要HER3激活诱导胃癌对拉帕替尼耐药的机制研究中文摘要目的：拉帕替尼作为治疗HER2阳性进展期胃癌患者的靶向新药，临床试验初步结果不尽如人意，旁通路激活是靶向药物耐药的重要机制之一。本研究通过体外

3、实验探讨HER3旁通路的激活对经拉帕替尼处理的HER2阳性胃癌细胞的生长和信号传导通路的作用，研究阻断HER3通路后HER2阳性胃癌细胞对拉帕替尼敏感性的影响及其分子机制。方法：(1)采用蛋白质印迹检测HER2阳性细胞NCI．N87、SNU．216、SKBR3的HER家族受体表达情况。克隆形成实验观察生长因子NRGl激活HER3受体后，肿瘤细胞对拉帕替尼药物敏感性变化。(2)采用CCK．8法检测拉帕替尼和pan．HER抑制剂AZD8931对NCI．N87生长的影响；采用双因素方差分析方法(Two．wayANOVA)来评价两药的联合效应。采

4、用siRNA基因沉默技术敲减HER3基因，观察HER3沉默是否增加肿瘤细胞对拉帕替尼的敏感性。(3)蛋白质印迹检测HER3旁通路激活诱导HER2阳性胃癌细胞耐药的分子机制。(4)利用免疫组化法检测154例2007．2010年间复旦大学附属肿瘤医院手术切除的胃癌原发灶组织芯片，观察HER3、P．HER3的表达情况。结果：(1)HER2阳性胃癌细胞NCI-N87、SNU一216以及乳腺癌细胞SKBR3的HER3、p-HER3受体表达明显上调。应用细胞因子NRGl激活HER3受体，显著增加拉帕替尼耐药克隆的出现(P<0．0001)，利用AZD8

5、931逆转NRGl诱导的拉帕替尼耐药。(2)拉帕替尼和AZD8931对胃癌细胞株NCI-N87的生长抑制作用呈剂量依赖性，两药呈协同作用(P<0．001)。利用siRNA沉默HER3基因，与scrambledsiRNA阴性对照相比，显著增加了拉帕替尼对HER2阳性肿瘤细胞杀伤作用(P<0．001)。(3)蛋白印迹显示拉帕替尼可以明显下调HER2阳性肿瘤细胞p-HER2、P．Akt、P．Erk蛋白的表达水平，而对EGFR、p-HER3以及非磷酸化的EGFR、HER2、HER3、Akt、Erk蛋白无明显影响。在胃癌细胞系中，与拉帕替尼相反，H

6、ER3激活剂NRGl可以明显上调HER2阳性细胞p-HER3、p-Akt蛋白的表达，在乳腺癌细胞SKBR3中同时上调p-Erk的蛋白表达水平。高剂量的AZD8931联合或不联合拉帕替尼，p-HER3、p-Akt蛋白的表达水平下调更明显，SKBR3细胞中同时伴有p-Erk明显下调。(4)HER2阳性胃癌组织中HER3、P—HER3的表达明显高于HER2阴性组织(P

7、l(t诱导HER2阳性胃癌细胞对拉帕替尼耐药，对RaLs．MAPK通路无影响。(2)阻断HER3受体增加了HER2阳性细胞对拉帕替尼的敏感性，有力的抑制了P13K．Akt通路的激活。(3)大部分HEI也阳性胃癌患者存在HER3旁通路的激活。关键词：胃癌；拉帕替尼；HER2；HER3；耐药中图分类号：R735．7万方数据硕士论文英文摘要TheMechanismofHER3ActivationinGastricCancerResistancetoLapatinibAbstractObjective：Asthenewtargetingdrugs

8、forthetreatmentofHER2-positiveadvancedgastriccancerpatients，theclinicaltrial’Spreliminaryresulto