cd133在肝癌干细胞中的表达及作用

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1、万方数据中图分类号B鱼Q2UDC6lO博士学位论文学校代码!Q§圣3密级公珏CDl33在肝癌干细胞中的表达及作用一ExI：andRolesofCD11hePSxoresslonantiKoles13i。nOt乙jjhepatocarcinomastemcells作者姓名学科专业研究方向学院(系、所指导教师姚若全临床医学外科学湘雅三医院黄飞舟教授论文答辩日期丝!!!答辩委员会主席．I出钞中南大学二0一三年五月万方数据学位论文原创性声明本人郑重声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经

2、发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。作者签名：膨日期：坐年旦月当学位论文版权使用授权书本学位论文作者和指导教师完全了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定：即学校有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版；本人允许本学位论文被查阅和借阅；学校可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用复印、缩印或其它手段保存和汇编本学位论文。保密论文待解密后适应本声明。作者签名：堂导师签名日期

3、：竺生年旦月当日期：丝年兰月二日万方数据摘要CDl33在肝癌干细胞中的表达及作用1CDl33对人类肝细胞癌恶性潜能的影响目的：探讨CDl33表达对人类肝细胞癌恶性潜能的影响。方法：检测有CDl33表达的HCC细胞的癌变特性。结果：在5个HCC组织中，有CDl33表达的细胞很少。我们通过下面两种方法衍生出两个不同的HCC细胞系：(1)在PLC／PRF／5细胞中转入CDl33的siRNA(CDl33si．PLC／PRF／5)，(2)磁珠法筛选出含有CDl33和不含有CDl33的细胞株。在敲除了CDl33的PLC／PRF／5细胞中，MMP．2和AD—蝴9在mRNA水平和蛋白水平检测出明

4、显下降。之后，我们检测出现MMP．2和ADAM9下降的HCC细胞的癌变特性。在CDl33si．PLC伊RF／5细胞和CDl33．H1m7(CDl33缺失)细胞中，肿瘤侵袭力和ⅦGF(血管内皮生长因子)都被抑制，这些与MMP．2的活性相关，而这种现象在有CDl33表达的HCC细胞中不存在。我们之前的研究表明ADAM9蛋白酶对ⅦCA起着关键作用，而MICA与自然杀伤细胞(NK)的灵敏度有关。在CDl33si．PLC伊RF／5细胞的和CDl33．H1m7细胞中降低AD—蝴9表达导致膜结合MICA的增加和可溶性ⅦCA的减少。CDl33si．PLC／PRF／5细胞和CDl33．H1】117

5、细胞对NK细胞的活性很敏感，这取决于膜结合MICA的表达水平，但有CDl33表达的肝癌细胞则没有这些特性。结论：CDl33表达加强了肝癌细胞的恶性潜能，促使肝癌存活。Ⅱ万方数据2CDl33表达对肝癌侵袭及上皮间质转化的影响目的：探讨表达CDl33肝癌干细胞的生物特性。方法和结果：采用细胞迁移实验分析细胞迁移能力，通过实时PCR法分析HepG2，Hep3B，Huh7，PLC／RFP／6，SNU423，SNU449，和SNU475等肝癌细胞系中的CDl33、侵袭相关基因(活剂受体(uPAR)，绒毛蛋白2(VIL2)，MMP1和MMP2)，和EMT调控剂(Snail，Slug，Twis

6、t，E．cadherin，andN．cadherin)的mRNA表达水平。同样也对病毒性乙型肝炎引起肝癌中49个样本进行了相同基因检测已经病理特征分析。在所有的肝癌细胞系中，CDl33阳性细胞比阴性细胞的细胞迁移性活跃，上调侵袭性和上皮细胞．间充质转化的相关基因中N．钙黏素的表达增加，而E．钙黏蛋白表达降低。本实验将肝癌细胞按CDl33mRNA的含量分成高CDl33组(CDl33含量最高的40％标本)和低CDl33组(CDl33含量最低的40％标本)。同低CDl33组相比，高CDl33组的血管侵犯频繁，侵袭性相关基因【uPAR(p=O．002)，MMPI(P=0．01)，andM

7、MP2(p=O．003)]和EMT调节因子[Snail(p=0．002)andTwist(p=O．0003)】的表达含量高。结论：HCC中CDl33高表达，CDl33高表达肝癌细胞能通过上调侵袭性相关基因和EMT相关基因而产生更强的侵袭性。关键词：肝癌；肿瘤干细胞；CDl33；上皮间质转化；III万方数据3CDl33表达对肝癌细胞株HepG2l顿铂化疗敏感性的影响目的：探讨CDl33表达与肝癌细胞株HepG2对顺铂化疗敏感性的关系。方法和结果：CDl33(+)细胞较CDl33(一