cd133及aldh在肿瘤侵袭中的作用及机制研究

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1、博士学位论文学校代码：10023学号：B2010005073CDl33及ALDH在肿瘤侵袭中的作用及机制研究所院：姓名：指导教师：学科专业：研究方向：完成日期：基础学院刘艳艳刘玉琴病理学与病理生理学肿瘤侵袭转移及复发机理研究2013．04．】0北京协和医学院博士研究生学位论文目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。sABST队CT⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．8第一部分lCDl33对结直肠癌侵袭能力的作用研究及机制探讨⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．11弓

2、l言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯12实验才5j科⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．1s实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯201．细胞培养⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．202．细胞总蛋白的提取⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．203．BCA法检测蛋白浓度⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．

3、204．RealTimePCR⋯．．．．．．⋯⋯．⋯．．．．．．⋯⋯⋯⋯．．．．⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯．．．．．⋯⋯⋯．．．．．．．．．．．⋯．⋯．⋯．．．．．⋯．⋯⋯⋯．．．．．．⋯．．21S．WesternBlotting⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．．．．．⋯⋯⋯⋯．．．。⋯⋯⋯⋯⋯．⋯．．．．⋯⋯．⋯⋯⋯．⋯⋯．．．．．⋯⋯⋯⋯．．．．⋯．⋯．246．细胞CDl33+率分析及CDl33Mg“、CDl33㈨分选⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．257．M1Hr法检测细胞增殖⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯268．细胞集落形成率测定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．269．Transwell体外侵袭实验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．2610．siRNA干扰CDl33或TIMP2的表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯2711．MMP2明胶酶谱检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯2812．质粒转化、扩增⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯2913．CDl33shRNA表达载体构建⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

5、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯2914．慢病毒包装⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3215．慢病毒感染目的细胞及稳定细胞株筛选⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3216．统计学方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯33实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．341．CDl33在六种结直肠癌细胞系中的表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．341．1流式细胞术检测CDl33在六种结肠癌细胞系中的表达情况。⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

6、⋯⋯⋯⋯⋯⋯341．2Westernblotting检测CDl33在六种结肠癌细胞系中的表达情况⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一342．CDl33M曲亚群比CDl33¨亚群具有更高的体外增殖能力与侵袭能力⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一352．1流式细胞术分选CDl33‰gh与CDl33嘶细胞并检测分选纯度⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯352．2CDl33拍gh亚群比CDl33J0w亚群具有更高的体外增殖能力⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。352．3CDl33m8h亚群比CDl33h亚群具有更强的集落形成能力⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．362．4CDl3

7、3M曲比CDl33

8、0”亚群具有更强的体外侵袭能力⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．363．siRNA下调CDl33后降低了HCTll6细胞的侵袭能力⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯371北京协和医学院博士研究生学位论文3。1siRNA可有效下调HCTll6细胞中CDl33的表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯373．2siRNA下调CDl33后对HCTll6细胞增殖能力没有影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯383．3siRNA下调CDl33后降低了HCTll6细胞的体外侵袭能力⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯394．CDl33

9、的下调影响TIMP．2的表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．394．1侵袭转移相关信号通路分子筛查⋯