骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠酒精性痴呆及机制

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1、学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得直昌太堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名(手写)：＼笨Ⅳ峨签字日期：矽、5'年学位论文版权使用授权书日本学位论文作者完全了解南昌大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权南昌大学可以将学位论文的全部或部

2、分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编本学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所和中国学术期刊(光盘版)电子杂志社将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》和《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》中全文发表，并通过网络向社会公众提供信息服务。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名(手写)：＼％扩≮Y’导师签名(手写)：黜j

3、t签字日期：伊＼>年‘月b日签字日期：3,of’年莎月b日摘要目的：1．探索建立酒精性痴呆模型的最佳条件。2．探讨骨髓间充质干细胞(BoneMarrow．derivedMesenchymalStemCe

4、lls，BMMSCs)移植治疗大鼠酒精性痴呆(alcoh01．associateddementia，AAD)的疗效及其机制。方法：1、以SD大鼠为研究对象，按数字随机方法分为：①20％酒精(4ml／kg／d)灌胃28d组：②20％酒精(4ml／kg／d)腹腔注射28d组；③20％酒精(4ml／kg／d)灌胃14d组；④20％酒精(8ml／kg／d)灌胃14d组；⑤20％酒精(12ml／kg／d)灌胃14d组；⑥生理盐水(4ml／kg／d)灌胃28d对照组；⑦生理盐水(4n舭egd)腹腔注射28d对照组；⑧生理盐水(4ml／kg／d)灌胃14d。探索建立AAD大鼠模型最佳条件

5、。2、Morris水迷宫行为学检测逃避潜伏期(EscapeLatency，EL)，以测定大鼠痴呆程度。3、HE组织化学染色检测酒精性痴呆大鼠海马齿状回脑组织损伤形态学变化。4、Hoechst荧光染色观察、计数酒精性痴呆大鼠海马齿状回凋亡神经细胞。5、直接贴壁法分离、培养、纯化和扩增BMMSCs。6、流式细胞仪鉴定BMMSCs表面抗原CD90、CD29、CD34、CD45。7、选择最适合的AAD大鼠模型建立方法[(20％酒精(4ml／kg·d)灌胃28d]，同时设立生理盐水对照组评估模型。AAD模型建立1周后采用静脉或立体定向移植途径移植3xl06BMMSCs或PBS，Mor

6、ris水迷宫行为学检测BMMSCs移植后EL改变。8、各组大鼠脑组织HE、Hoechst33342染色观察、计数BMMSCs静脉移植或立体定向移植后脑组织海马齿状回形态和凋亡神经细胞数的变化。9、免疫组织化学检测大鼠海马齿状回、CAl区、CA3各区BDNF的表达。10、采用比色法检测大鼠血清T-SOD和GSH．PX活力。摘要结果：l、与相应生理盐水对照组相比，20％酒精(4ml／kg·d)灌胃14d或28d组均可诱导大鼠学习记忆功能明显损害，大鼠EL均显著延长(尸

7、20％酒精(12ml／kg·d，高剂量)灌胃14d等3组大鼠EL延长与20％酒精(4ml／kg·d)灌胃28d组无显著统计学差异(胗O．05)。2、HE染色显示各AAD模型组大鼠海马齿状回出现散在或局灶分布的异形神经细胞。3、Hoechst33342荧光染色显示各AAD模型组大鼠海马齿状回的异形细胞呈局灶碎片、浓染的凋亡形态，与相应对照组相比其凋亡细胞增多，与对照组相比酒精灌胃14d和28d增多均有显著性差异(P<0．05)，且随着酒精灌胃时间延长，海马齿状回凋亡神经细胞数显著增多(F=20．74，P<0．001)。然而酒精对神经细胞凋亡的影响并不随酒精剂量的增加而增加(P

8、>0．05)。4、BMMSCs贴壁生长，形态呈梭形，流式细胞仪鉴定高表达CD29(98．6％)和CD90(80．4％)，低表达CD34(O．1％)和CD45(5．8％)。5、与生理盐水对照组相比，选择20％酒精(4ml／kg·d)灌胃28d成功建立AAD模型，AAD模型组大鼠EL显著延长(尸<0．05)。AAD模型大鼠BMMSCs静脉或立体定向移植2周后与PBS移植组比较，大鼠空间定向学习记忆功能显著改善，MWM行为学检测EL均显著缩短。6、BMMSCs尾静脉移植和立体定向移植2周后与PBS移植组相比，AAD大鼠海