鞘内间断注射不同浓度罗哌卡因在长时间对大鼠脊髓神经毒性影响及机制研究

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1、中图分类号UDCR614610博士学位论文学校代码!Q§3三密级公珏鞘内间断注射不同浓度罗哌卡因在长时间对大鼠脊髓神经毒性影响及机制研究rnl●●■■nl1●一●●J■lneneUrot0XlCeIIeCtandmeCnanISm0IIntratneCalropivacaineatlongtimeinratspinalcord作者姓名：孙志华学科专业：临床医学研究方向：麻醉学学院(系、所)：湘雅医院指导教师：郭曲练教授论文答辩日期型!：』：兰垒答辩委员会主席中南大学二0一三年五月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别

2、加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者虢卑嗍生年￡月些日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名：日期：兰生年』月

3、丛日牛博士学位论文中文摘要鞘内注射不同浓度罗哌卡因在不同时间点对大鼠脊髓神经毒性影响及机制研究中文摘要摘要目的：1．观察鞘内间断注射O．5％和l％罗哌卡因后28天对大鼠脊髓、神经根超微结构的影响及机制研究，探讨ERK信号通路、Akt信号通路是否参与了罗哌卡因的脊髓神经毒性；观察鞘内间断注射1％罗哌卡因+神经营养素一3(neurotrophin．3)后28天对大鼠脊髓、神经根超微结构的影响及机制，探讨neurotrophin．3(NT．3)是否能减轻和预防罗哌卡因的神经毒性作用。2．体外观察NT-3对于罗哌卡因细胞毒性的影响。为临床上连续腰麻更安全使用罗哌卡因提供理论依据。方法：1．改良Y

4、aksh法鞘内置管成功的雄性SD大鼠144只，体重280～3209，月龄为1．5月。随机分为生理盐水组(NS组，n=36)，O．5％罗哌卡因组(M组，n=36)，1％罗哌卡因组(R组，n=36)，1％罗哌卡因+NT-3组(T组，n=36)。NS组大鼠鞘内注入O．9％生理盐水、M组大鼠鞘内注入O．5％罗哌卡因、而R组和T组大鼠鞘内注入1％罗哌卡因各0．12ml／kg，间隔1．5h给药一次，持续给药12h。其中T组同时再鞘内注入0．1mg／kg的NT-3。各组均观察1d、3d、5d、7d、14d、28d。NS组记为“NSl组、NS3组、NS5组、NS7组、NSl4组、NS28组”(n=6)。

5、M组记为“M1组、M3组、M5组、M7组、M14组、M28组”(n=6)。R组记为“R1组、R3组、R5组、R7组、R14组、R28组’’(n=6)。T组记为“T1组、T3组、T5组、T7组、T14组、T28组”(n=6)。分别检测给药前和各时间点处死前各组大鼠后肢机械刺激缩足反应阈值即机械痛阈和热潜伏缩爪阈值即热痛阈以及最后一次给药后运动功能评分来观察其行为学的变化；完成行为学检测Il博士学位论文中文摘要后的各组大鼠，取脊髓腰膨大及相应节断行光镜和透射电镜观察，并进行病理学评分；Tunel法检测脊髓凋亡；免疫组化检测各组大鼠腰膨大脊髓ERKl(P44MAPK)、Akt及caspase一

6、3蛋白的表达；Westem—blot检测各组磷酸化ERK和磷酸化Akt蛋白表达及相对定量比情况。2．细胞实验：体外观察NT-3对于罗哌卡因细胞毒性的影响将PCI2细胞分为三组：对照组(YS组)：不予任何处理，常规培养48小时；罗哌卡因组(R组)：15mM罗哌卡因干预48h；罗哌卡因+NT-3组(T组)：15mM罗哌卡因干预48h并同时给予NT-3100ng／ml处理48小时。检测干预后每组细胞计数；MTT方法测定细胞成活率的变化；台盼兰染色测定每组细胞活性；Westemblot法检测各组细胞磷酸化ERK和磷酸化Akt蛋白表达及相对定量比情况。结果：1．NS组和M组各对应时间组相比，大鼠机

7、械性触诱发痛阈和热刺激诱发痛阈无显著性差异。各组大鼠机械性触诱发痛阈与NS组和M组各对应时间组相比：R1、R3、R5组和T1、T3组大鼠机械触诱发痛阈升高(P<0．05)，其中以R1组升高最明显；与R组相对应时间组相比：T5组大鼠机械痛阈显著降低(P