非血缘hla不全相合双份脐血移植植入动力学的基础研究

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1、安徽医科大学硕士学位论文非血缘HLA不全相合双份脐血移植植入动力学的基础研究姓名：周淼申请学位级别：硕士专业：内科学（血液病）指导教师：孙自敏20100501安徽医科大学硕士论文非血缘HLA不全相合双份脐血移植植入动力学的基础研究中文摘要背景与目的脐血造血干细胞是良好的造血干细胞（haematopoieticstemcell,HSC）来源，但脐血中含有的HSC数量相对不足从而限制了其在成人中的应用。使用双份脐血混合移植治疗白血病获得成功，激起人们对其相互作用机制的研究。研究证实，接受双份脐血移植的患者，大部分患者长期造血重建的仅来源于一份脐血，而另一份脐血在植入早期即被排斥，

2、但是双份脐血移植的植入动力学的机制目前尚无定论，推测双份脐血中的淋巴细胞与优势份脐血的产生相关。探讨双份非血缘脐血移植用于恶性血液病植入动力学的规律和临床疗效。实验方面将双份脐血的CD34+细胞与CD3+细胞混合培养，观察CD3+细胞对CD34+细胞的增殖分化有无影响。方法临床上选择21例恶性血液系统恶性疾病行非亲缘双份脐血移植的患者为观测对象，使用复合扩增荧光标记短串联重复序列（STR-PCR）结合毛细管电泳技术，动态检测DUCBT受者移植后脐血植入情况，统计与植入可能相关的各项数据。实验中建立液体和半固体培养体系，将免疫磁珠分选纯化的双份脐血的CD34+细胞和CD3+细胞

3、混合培养6天和14天。以流式细胞计数观测CD34+细胞培养后的分化指标（CD33，CD41，CD71）；计数集落形成单位（GM-CFU、BFU—E、GEMM-CFU）分析CD34+细胞的增殖情况。结果1.脐血移植植入情况18/21例9DUCBT获得造血重建,中性粒细胞绝对计数（ANC）＞0.5×10/L的中位时间为移9植后20（14～35）天，血小板＞20×10/L的中位时间为移植后34.5（25～49）天。经STR-PCR技术检测显示17/18例受者形成单份脐血的优势植入。非优势份脐血输注的有核细胞总数（totalnucleatedcell，TNC）,CD34+细胞数和CD

4、3+775细胞数为2.17×10NC/Kg(0.96-3.98×10NC/kg)，1.16×10CD34+/Kg566(0.36–2.70×10CD34+/Kg)与1.71×10CD3+/Kg(0.40-10.65×10CD3+/kg)，8安徽医科大学硕士论文7优势份脐血此两项分别为2.34×10NC/Kg(1.87-4.457556×10NC/kg),1.15×10CD34+/Kg(0.08–4.00×10CD34+/Kg)和3.225×106CD3+/Kg(0.51-13.92×10CD3+/kg，差异不具有显著性(P=0.718,0.936,0.073)。2.液体共培养

5、后各份CD34+细胞表面分化指标的变化脐血CD34+细胞分选富集的纯度为（98.5±0.92）%。3天实验组和对照组的各项分化指标无差异（P>0.05）；6天的CD33、CD71实验组明显低于对照组，而CD41明显高于对照组（P＜0.05）。3.半固体共培养后CD34+细胞增殖能力的变化实验组的红系集落形成单位(BFU—E)及粒单细胞集落形成单位(GM-CFU)数低于对照组（P＜0.05），混合细胞集落形成数(GEMM-CFU)与对照组无差别（P>0.05）。结论1.双份脐血移植安全有效，应用前景广阔。TNC和CD3+细胞数可能与优势份脐血的产生无相关；2.将两份脐血的CD3

6、4+细胞和CD3+细胞体外混合培养对CD34+细胞的增殖分化能力有影响，推测双份脐血间的相互作用可部分的通过CD3+细胞介导。关键词双份脐血植入动力学CD34+细胞体外共培养分化增殖9安徽医科大学硕士论文FundamenalstudyontheengraftmentkineticsindoubleunrelatedcordbloodstemcelltransplantationEnglishAbstractBackgroundandobjectiveUmbilicalcordblood(UCB)isagoodsourceofhematopoieticstemcells(HSC

7、),butthenumbersofHSCarerelativelysmallthuslimitingitsapplicationinadults.Thesuccessfultreatmentforleukemiawithdoubleunitsumbilicalcordbloodtransplantation(UCBT)arousedtheresearchonthemechanismofinteractionbetweenthetwounitsUCB.Previousresearchrevealeddom