长期酒精暴露诱导胰岛素抵抗对sms2--小鼠肝脑的损伤及其机制的实验性研究

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1、单位代码10475学号104753101214分类号R741硕士学位论文-/-长期酒精暴露诱导胰岛素抵抗对SMS2小鼠肝脑的损伤及其机制的实验性研究ThemolecularmechanismonthechronicalcoholexposureinducingInsulinresistancecausingtheinjuryoftheliver-braininSMS2knockoutmice专业名称：神经病学研究方向：神经退行性疾病基础与临床申请学位类别：医学硕士申请人：赵静雅指导教师：鲁广秀教授二〇一三年四月THEMOLECULARME

2、CHANISMONTHECHRONICALCOHOLEXPOSUREINDUCINGINSULINRESISTANCECANSINGTHEINJURYOFTHELIVER-BRAININSMS2KNOCKOUTMICEADissertationSubmittedtotheGraduateSchoolofHenanUniversityinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofMedicineByZhaoJingyaSuPervisor:Prof.LuGuangxiu

3、APril,2013关于学位论文独立完成和内容创新的声明本人向河南大学提出硕士学位申请。本人郑重声明：所呈交的学位论文是本人独立完成的，对所研究的课题有新的见解。据我所知，除文中加以说明、标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含其他人为获得任何教育、科研机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同事对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位申请人（学位论文作者）签名：赵静雅2013年5月12日关于学位论文著作权使用授权书本人经河南大学审核批准授予硕士学位、作为学位论文的作者，本人

4、完全了解并同意河南大学有关保留、使用学位论文的要求，即河南大学有权向国家图书馆、科研信息机构、数据收集机构和本校图书馆等提供学位论文（纸质文本和电子文本）以供公众检索、查阅。本人授权河南大学出于宣扬、展览学校学术发展和进行学术交流等目的，可以采取影印、缩印、扫描和拷贝等复制手段保存、汇编学位论文（纸质文本和电子文本）。学位获得者（学位论文作者）签名：赵静雅2013年5月12日学位论文指导教师签名：鲁广秀2013年5月12日摘要饮酒在我国的历史源远流长，如今随着人们社会交际的增多和频繁，我国成为了酒精及其饮品的消费大国，因此，近年来酒精对机

5、体的危害备受关注。目前研究发现，长期过量饮酒不仅会导致酒精性肝病、酒精性痴呆和Alzheimer’s病等，而且与糖尿病、糖尿病脑病及胰岛素抵抗（Insulinresistance，IR）等关系密切。临床资料显示，以IR为典型特征的2型糖尿病及酒精性脂肪性肝炎常伴有不同程度的认知功能障碍，此外减轻IR可以改善糖尿病、IR及Alzheimer’s病个体的认知能力。另外，在2009年，美国布朗大学神经病理学专家SuzanneM.delaMonte等人提出了一个假设，即酒精介导了“肝脑轴”的神经变性，其中酒精暴露导致胰岛素抵抗起着关键性的作用，而

6、神经酰胺则是肝脑联系的桥梁，虽然有证据支持上述结论，但仍需进一步研究支持并探讨其发生机制。因此，我们利用神经鞘磷脂合成酶2基因敲除（Sphingomyelinsynthase2knockout,-/--/-SMS2）会导致神经酰胺堆积的特点，建立SMS2小鼠酒精暴露模型，通过透射电子显微镜、westernblot及免疫组织化学等技术，观察神经酰胺对酒精诱导胰岛素传导通路及肝脑损伤的影响，分析神经酰胺、酒精、胰岛素抵抗的关系，探讨神经酰胺、胰岛素抵抗在酒精引起“肝脑轴”神经变性中的作用，为进一步认识酒精毒理学的机制提供理论依据。目的研究长期

7、酒精暴露与胰岛素敏感性之间的关系并探讨其相关的分子机制；观察神经酰胺在酒精引起胰岛素抵抗过程中的可能作用；观察长期酒精暴露引起的肝脑损伤与氧化应激的关系，探讨酒精引起多系统损伤的机制，神经酰胺在酒精暴露诱导海马应激损伤中的调节作用。-/-方法建立C57BL∕6J野生型小鼠和SMS23月龄小鼠的长期酒精暴露模型，两基因型小鼠分别分为对照组、中剂量酒精组和高剂量酒精组，共计90只，建模5个月后，用血糖仪测定小鼠空腹血糖值，用酶学法检测血清胰岛素浓度，并计算胰岛素抵抗指数。利用H.E.和Masson染色观察肝脏细胞和结构变化，透射电子显微镜观察

8、肝脏超微结构变化，利用免疫荧光染色法观察各组小鼠海马CA1区胰岛素受体底物2（Insulinreceptorsubstrate2，IRS2）阳性细胞表达情况，及海马CA1区氧化应激引起的阳性细