金属硫蛋白ⅰ+ⅱ在七氟烷预处理大鼠海马神经元延迟性保护中的功能

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1、中图分类号UDCR751博士学位论文学校代码密级10533金属硫蛋白I+II在七氟烷预处理大鼠海马神经元延迟性保护中的功能RoleofMTI+IIinDelayedProtectiveeffectsofsevofluranepreconditioninginHippocampalneuronsofrats作者姓名：刘际童学科专业：临床医学研究方向：麻醉学学院(系、所)：湘雅二医院指导教师：徐军美教授论文答辩日期答辩委员会主席中南大学二O一三年五月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加

2、以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：日期：二塑年』月当学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供

3、信息服务。日期：——年一月一日博士学位论文中文摘要第一章七氟烷预处理对大鼠肝、脑及心脏基因表达谱的影响目的：利用DNA芯片方法探讨七氟烷预处理对大鼠肝脏、脑及心脏基因表达谱的影响。方法：七氟烷预处理大鼠后，DNA微阵列法检测大鼠肝、脑及心脏基因表达差异，qRT-PCR验证其中三个差异表达的基因。结果：根据事先制定的数据处理标准，2％的七氟烷预处理90分钟后，所有组织表现出基因表达差异。在这些表达差异的基因里有34个基因在至少两个组织中呈现同一方向的表达变化，其中19个上升，15个下降。本研究选取了三个在肝脏中表达有影响的三个基因进行qRT-PCR试验，qR

4、T-PCR实验结果与DNA微阵列结果一致。结论：鉴别了34种在大鼠肝脑心脏经七氟烷预处理后表达差异的基因。关键词预处理，七氟烷，DNA微阵列，过氧化物氧化还原酶5，金属硫蛋白，蛋白酪氨酸磷酸酶受体C第二章金属硫蛋白I+II在七氟烷预处理原代培养的大鼠神经元过程中的作用目的：探讨七氟烷延迟预处理在大鼠原代培养神经元中的保护特性及金属硫蛋白I+II(Metallothionein，MT-I+II)在麻醉延迟预博士学位论文中文摘要处理介导的保护作用中的作用机制。方法：1)原代神经元培养；2)七氟烷预处理；3)建立体外氧一葡萄糖剥夺模型；4)qRT-PCR检测MT

5、_I+IImRNA表达水平：5)乳酸脱氢酶(LDH)检测神经元毒性；6)微管相关蛋白．2／胶质纤维酸性蛋白检测神经元毒性；7)免疫荧光检测MTI+II的神经元中的定位情况；8)siRNA抑制MTI+II的表达；9)外源MTI+II蛋白转染。结果：1)1．5％七氟烷预处理3小时组缺糖缺氧后(Oxygen—GlueoseDeprivationOGD)在任一时间点对神经元毒性明显小于没有预处理组(P

6、；在96小时时保护作用仍然有31．90／社5．2％；n=29)。2)OGD3小时对神经元和神经胶质都有毒性作用，但是神经元的毒性作用更大，其生存率是39．6士7．8％，而神经胶质在OGD3h后生存率是80．2+10．5％。但是七氟烷预处理组，神经元存活率恢复至85．3+9．2％，存活率上升程度超过125％，而神经胶质存活率上升程度只有22％。对神经元进行两因素方差分析表明，OGD和七氟烷预处理(APC)的主效应显著(P

7、间T检验也有差异，P<0．01，也能证实这一结果。神经胶质的两因素方差分析结果则发现OGD和七氟烷预处理的主效应显著(P0．05，n=10)上升至34．8+9．2％(转染3．21．tMMTI+II

8、，P<0．001，n=10)。4)MTImRNA表达水平在预处理1