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《藻红蓝蛋白β亚基体内重组及其色谱分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、第32卷第1期水生生物学报Vol.32,No.12008年1月ACTAHYDROBIOLOGICASINICAJan.,2008藻红蓝蛋白β亚基体内重组及其色谱分析1,2111王锋周明赵金梅赵开弘(11华中科技大学环境科学与工程学院,武汉430074;21中国测试技术研究部,成都610021)摘要:藻胆蛋白是蓝藻中的捕光蛋白,其生物合成的重要一步是藻胆色素与脱辅基蛋白的连接。大多数藻胆色素的正确连接都需要结合位点专一和对色素的构象有选择性的裂合酶来催化完成,但是这方面的报道不是很多。藻红蓝蛋白由两个亚基组成β,亚基(简称β2PEC)含171个氨基酸残基
2、及两个辅基色素藻蓝胆素(简称PCB),分别在Cys284和Cys2155位以硫醚键共价相连。通过同源性分析获得的由编号为alr0617基因编码的蛋白为藻红蓝蛋白β亚基(β2PEC)中的Cys284与PCB的连接的催化酶。为了研究层理鞭枝藻藻红蓝蛋白(PEC)β亚基(β2PEC)中藻蓝胆素(PCB)与脱辅基蛋白的连接机制,通过体内重组方式得到色素蛋白PCB2PecB(C155I),分析表明该色素蛋白与β2PEC的吸收光谱和荧光光谱一致。酸性尿素变性实验证明得到的色素蛋白中的藻蓝胆素PCB没有被破坏。使用胃蛋白酶对天然藻红蓝色素蛋白和重组藻红蓝色素蛋白进行
3、相同条件的水解并得到各自的色素肽,高效液相色谱分析表明这两种色素肽相同,由此证明了编号为alr0617基因编码的蛋白质能催化PCB与PecB(C155I)正确共价偶联。关键词:藻红蓝蛋白β亚基;体内重组;水解;色谱分析中图分类号:Q754文献标识码:A文章编号:100023207(2008)0120074205藻红蓝蛋白(Phycoerythrocyanin)是藻胆蛋白的为alr0617。通过构建质粒pCDFDuet2alr0617,运用一种,它在某些缺乏藻红蛋白而具有异形胞的藻类体内重组技术,得到色素蛋白PCB2PecB(C155I)。使中代替藻红蛋
4、白充当捕光天线色素,具有吸收和传用胃蛋白酶(Pepsin)将该色素蛋白与天然β2PEC进[1]递光能的作用。在层理鞭枝藻中,藻红蓝蛋白取行完全一致条件下的水解,得到连接PCB的色素代藻红蛋白,将所吸收的光能传递给藻蓝蛋白,根据肽。对得到的两种色素肽进行高效液相色谱分析,[2]Fueglistaller等人对层理鞭枝藻的研究表明:藻红一方面说明alr0617对β2PEC中Cys284与PCB连接蓝蛋白由两个亚基组成α,2亚基(简称α2PEC)含162的催化作用,另一方面进一步定性说明天然层理鞭个氨基酸残基及一个辅基色素藻紫胆素(简称枝藻藻红蓝蛋白β亚基分
5、别在Cys284和Cys2155位PVB),在Cys284位以硫醚键共价相连,经分离提纯与两个辅基色素PCB相连。[3]的α2亚基具有可逆光致变色性质;β亚基(简称β21材料与方法PEC)含171个氨基酸残基及两个辅基色素藻蓝胆素(简称PCB),分别在Cys284和Cys2155位以硫醚键共111材料与仪器大肠杆菌BL21由本实验室保价相连。在藻胆蛋白氨基酸的一级结构中多肽链中存;表达载体pACYCDuet21、pCDFDuet21、pET30a购自部的Cys284是藻胆色素的主要结合位点。Novagen公司;亲和层析介质购自AmershamPharm
6、a2本实验以层理鞭枝藻为研究对象,利用定点突cia公司;胃蛋白酶,2500—3500U/mg,Sigma公司;[4]变技术对β2PEC构建半胱氨酸突变体,从而得到Bio2GelP260凝胶,Bio2Rad公司;高效液相色谱分析只在Cys284与PCB共价结合的脱辅基蛋白PecB仪:Waters269522487;分析柱:20RBAX300SB2C18;乙(C155I)。通过同源性分析,发现一种使层理鞭枝藻腈,色谱纯。pET2pecB(C155I)质粒、pACYCDuet2ho12β2PEC中Cys284与PCB连接的催化酶基因,其编号pcyA质粒为本实
7、验室构建。收稿日期:2006202213;修订日期:2007201208基金项目:国家自然科学基金项目(30540070)资助作者简介:王锋(1980—),男,汉族,河南濮阳人;硕士;主要从事生物技术方面研究。E2mail:wangfengpy@163.com通讯作者:周明,Tel:86227287792039;E2mail:wangfengpy@163.com©1994-2008ChinaAcademicJournalElectronicPublishingHouse.Allrightsreserved.http://www.cnki.net1期王锋
8、等:藻红蓝蛋白β亚基体内重组及其色谱分析75112基因片段的PCR扩增与分子克隆设计了两低温冰
