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《当归多糖aps_b_的结构特征及体外抗肿瘤作用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、第10卷第8期2010年3月科学技术与工程Vol110No18Mar12010167121815(2010)0821839205ScienceTechnologyandEngineering2010Sci1Tech1Engng1生物技术当归多糖APS2bII的结构特征及体外抗肿瘤作用3陈曦曹蔚孙阳梅其炳(第四军医大学药学系药理学教研室,西安710032)摘要从当归(Angelicasinensis(Oliv)Diels)中提取粗多糖,经阴离子交换纤维素柱和SephadexG2100凝胶柱色谱分离纯化,得白色粉末状多糖APS2bII。采用高效尺寸排阻色谱、红外光谱、高效液相色谱等方法进行了结构的
2、初步分析;采用四甲基4偶氮唑蓝比色法观察APS2bII对多种肿瘤细胞的生长抑制作用。结果表明APS2bII为均一组分,分子量为1.3×10Da,由葡萄糖2半乳糖2木糖2阿拉伯糖(8.4︰2.7︰1.8︰1.0)构成,是首次从当归中分离出的杂多糖。APS2bII对多种肿瘤细胞的增殖有抑制作用。关键词当归多糖MTT法抗肿瘤中图法分类号Q538R284.2;文献标志码A当归为伞形科植物Angelicasinensis(Oliv.)开发、应用提供了实验依据。Diels的干燥根,主产于甘肃岷县(秦州),为著名常用传统中药,在本草纲目和神农本草经中均有记载1材料与方法其作为妇科之要药,有补血活血、润肠调经
3、之功效。近年来,随着多糖增强机体免疫功能及抗肿瘤作用1.1仪器的发现,当归多糖也引起了愈来愈多的国内外研究EQUINOX55红外光谱仪为Bruker公司产品;[1][2]人员的关注。我们实验室商澎等前期的研究6890N气相色谱仪为Agilent公司产品;2690高效液表明:当归总多糖对腹水型肿瘤EAC和腹水型白血相色谱仪(配2414示差折光检测器)为Waters公司病L1210荷瘤鼠,可延缓腹水产生,提高生命延长产品;TSKG4000PW凝胶色谱柱(7.5mm×30cm)率。进一步研究发现:小分子量的当归多糖具有更为Tosoh公司产品;CR21F型离心机为Hitachi公司[3,4]产品强的抗
4、肿瘤作用。可见,当归多糖的结构与其;Nu23500E型CO2孵箱为Nuaice公司产品;抗肿瘤作用有密切的关系。据此,通过对当归总多DG3022酶标仪为BioRad公司产品。糖的分离、纯化,得到1种当归均一性杂多糖APS21.2药品与试剂bII,以高效尺寸排阻色谱测定了APS2bII的分子量,实验使用当归为人工种植,于2007年11月采[4,5]通过红外光谱(IR)法对其结构进行了初步分析,通集于甘肃岷县,按照本实验室常规方法水提,经过高效液相色谱(HPLC)法测定了其单糖的组成。脱蛋白、透析等步骤得到当归总多糖APS。标准分此外,对APS2bII体外抗肿瘤活性进行了初步筛选,子量Dextra
5、nT系列葡聚糖、标准单糖及糖醛酸、三进一步探讨了其抗肿瘤机制,为多糖抗肿瘤药物的氟醋酸、12苯基232甲基252吡唑酮(PMP)、四甲基偶氮唑蓝(MTT)购自Sigma公司;DEAE2sephadexA22009年12月8日收到国家自然科学基金(30701081)资助25及SephadexG2100购自Amersham公司;RP2第一作者简介:陈曦,硕士研究生。MI1640培养基及胎牛血清购自Gibco公司;其它均3通信作者简介:梅其炳,博士生导师。Email:qbmei@fmmu.edu.cn。为国产分析纯试剂。1840科学技术与工程10卷-11.3实验瘤株Na2SO4溶液;流速:0.5mL
6、·min;柱温:室温。样人宫颈癌细胞株HeLa、人肝癌细胞株HepG2、品同法制备,进样。人乳腺癌细胞株MCF27、人结肠癌细胞株SW11161.6IR分析均为我室传代保株;细胞培养使用RPMI1640培养称取2mgAPS2bⅡ,与干燥的溴化钾混匀,在玛-1液(含10%灭活的胎牛血清、100U·mL青霉素瑙研钵中研磨(5～10)min,压片,在红外光谱仪上-1-1-1和100mg·L链霉素),置于37℃、5%CO2孵箱测定4000cm～400cm的IR。[8]中培养,取对数生长期细胞用于实验。1.7单糖组成分析1.4当归多糖APS2bII的提取与分离称取10mgAPS2bⅡ于试管中,加入5mL
7、的2-1-1取一定量的APS溶于0.1mol·L氯化钠溶mol·L三氟乙酸,充N2后封管,在120℃水解4液-1(终浓度为5%),经过0.45μm滤膜过滤,用h,用0.3mol·LNaOH水溶液中和至pH值为7,-1DEAE2sephadexA225(80cm×3.5cm)凝胶柱进行浓缩备用。取2mmol·L各单糖标准溶液100μL-1分级(流速1.5mL·min,流出液10mL/管自动部或多糖水
