苹果组培苗不定根发生过程中mrna差异显示表达及生根移栽体系优化研究

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1、分类号：曼鱼鱼!：!密级：公珏单位代码：10086苹果组培苗不定根发生过程中mRNA差异显示表达及生根移栽体系优化研究StudiesptimizationystemforRNADifferentialUdies0nopumizationsystemIormitterential删A1n‘●^'·-···^·-ExpressioninPtocessoladventitiOUSroottOrmatlon．rootingandtransplantationinAppletissue-culturedsee

2、dling学位申请人：田河指导教师：杜国强教授学科专业：果树学学位类别：农学硕士授予单位：河北农业大学答辩日期：二。一三年六月三日独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得塑兰垦盔些盘鲎或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：旧牙签字日期：渐多年∥月弓日关于

3、论文使用授权的说明本学位论文作者完全了解塑皇垦盎些盘堂有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权煎兰垦盎些盘堂可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：四；百导师签名：翻司1L／签字日期：)l，f弓年∥月多日签字日期：劲B年石月多日学位论文作者毕业后去向：工作单位：通讯地址：电话：邮编：摘要lIIIIIIll

4、IIIIUllllbIIIY2387159试验以苹果矮化砧木组培苗M26为试材，应用mRNA差异显示技术，初步建立了苹果矮化砧木生根过程中的相关基因筛选体系。同时以M26为试材，建立了蛭石替代琼脂生根体系。以苹果组培苗SH28、SH29为试材研究了生根组培苗移栽过程中环境因素对幼苗生长的影响，主要研究结果如下：1、苹果组培苗mRNA差异显示PCR优化后结果：退火温度为45℃，201aLPCR体系为：稀释10倍的模板cDNA2uL，Taq酶2．0U，上游随机引物和下游锚定引物1：1配比，浓度分别为2．

5、5lmaoI·L～，dNTPs加入量为125lxmol·L一。采用优化后的PCR程序及体系，用8个上游随机引物和3个下游锚定引物共计24对引物对样品进行PCR扩增，有11对引物可扩增出条带，其中9对引物得到了较好的扩增结果，主带清晰，扩增的带型差异明显，共计扩增出41条差异基因，其中38个特异表达基因，2个在诱导后上调表达基因，1个在诱导后下降表达的基因。2、将组培苗在含有0．6mg·L—IBA的琼脂生根培养基中诱导7d,-一9d后，扦插于蛭石培养基中，生根率均达94％以上，显著高于琼脂培养基处理，

6、且侧根数量显著大于诱导11d～13d和琼脂培养基处理。蛭石培养基中添加20g·L’1蔗糖，生根率达95．18％，生根条数、侧根数和根长显著优于未添加蔗糖处理。基质水分含量也明显影响生根，50％～90％水分条件下，生根率均在96％以上，显著高于琼脂培养基，生根条数各处理间无差异，侧根数以50％'--'60％含水量最高，达6．69和6．46，显著高于其他处理，根长以琼脂培养基最大，为2．89cm。经100mg·L‘1IBA速蘸处理后，扦插于含有20g·L-l蔗糖、60％含水量的蛭石培养基中，生根率显著提

7、高，达到100％，生根数目、根长、侧根数目得到了大幅度提高，根系质量得到明显的改善。3、采用建立的蛭石生根培养体系，进行组培苗瓶外生根研究。结果表明组培苗在含有0．6mg·L—IBA的琼脂生根培养基中诱导4d，移至温室炼苗5d后直接扦插于蛭石基质中，4"-"5d浇灌一次不含蔗糖的1／2MS营养液，组培苗生根率、生根条数和根长与瓶内生根培养无明显差异，但侧根数目显著提高，同时大大缩短了育苗时间。4、生根组培苗在培养室培养8d，移至温室锻炼17d后移栽，组培苗生长量明显增加，为最佳时间组合。组培苗在培养

8、室培养8d，温室锻炼1ld、17d、25d三个处理中，也以17d为最佳炼苗时间，移栽组培苗株高、叶片数、单株叶面积和单叶片面积均有明显提高。以草炭土与蛭石1：2或1：l配比为移栽基质，组培苗移栽成活率较高，分别达90．77％和88．24％，显著高于草炭土与蛭石2：l配比；同时草炭土与蛭石l：1配比处理还可有效提高幼苗生长量。草炭土经灭菌处理后，组培苗单株叶面积及单叶片面积显著增加，苗木生长更健壮。基质中添加O．1％枯草芽孢杆菌对幼苗生长量未见显著作用。浇灌供试营养液4