苹果和梨树的主要类病毒检测及序列分析

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1、分类号：密级：学号：2010107003单位代码：10759石河子大学硕士学位论文苹果和梨树的主要类病毒检测及序列分析学位申请人王钰婷指导教师牛建新教授申请学位门类级别农学硕士学科、专业名称果树学研究方向果树生物技术所在学院农学院中国·新疆·石河子2013年6月DetectionandsequenceanalysisoftheviroidsofappleandpearinXinjiangProvince，ChinaADissertationSubmittedtoShiheziUniversityInPartialFulfillmentoft

2、heRequirementsfortheDegreeofmasterofAgricultureByWangYuting(Biotechnologyoffruittrees)DissertationSupervisor:Prof.NiuJian-xinJune,2013石河子大学学位论文独创性声明及使用授权声明学位论文独创性声明本人所呈交的学位论文是在我导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中作了明确的说明

3、并表示谢意。研究生签名：时间：年月日使用授权声明本人完全了解石河子大学有关保留、使用学位论文的规定，学校有权保留学位论文并向国家主管部门或指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文在学校图书馆保存并允许被查阅。有权自行或许可他人将学位论文编入有关数据库提供检索服务。有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。研究生签名：时间：年月日导师签名：时间：年月日摘要本文对采自新疆和静县223团场的40份多年生苹果样品，18份多年生梨树样品，进行RNA分子提取，正反向电泳、RT-PCR检测及原位RT-PCR检测。检测结

4、果表明：苹果的40份样品中，其中‘金冠’品种的Y1、Y6、Y8、Y10带有苹果锈果类病毒（Applescarskinviroid,ASSVd），其余均为健康植株；梨树的18份样品中，其中‘早酥梨’Z3、Z7带有苹果锈果类病毒，其余均为健康植株；此地区ASSVd的感染率为10.3%。对所有样品进行苹果凹果类病毒（Appledimplefruitviroid,ADFVd）和苹果皱果类病毒（Applefruitcrinkleviroid,AFCVd）进行检测，所有样品均未检测到这两种类病毒。对检测阳性的苹果和梨样品的RNA进行克隆、测序与序列分析

5、。结果表明：将所得的ASSVd序列与GenBank中国内外已报道的序列进行比较分析，同源性为85%以上。从新疆苹果和梨树上分离得到的ASSVd序列变异较小，特别是中央保守区几乎没有变化，且不同地域与寄主之间的序列同源性也极高，说明ASSVd序列的变异与地域、寄主等无明显相关性。对所测阳性样品对应的叶片、果皮及种子分别进行RT-PCR检测，结果表明，三者都被ASSVd侵染。说明ASSVd侵染植株体内的范围广，植株的韧皮部、叶片及果实均有分布。本研究在GenBank中共登录了6条ASSVd序列，其中来自苹果（金冠）的有4条（登录号：KC1108

6、58~KC110861），来自梨树（早酥梨）的有2条（登录号：JX861258~JX861259）。对ASSVd的RT-PCR体系进行了系统的研究，建立并优化了苹果锈果类病毒的RT-PCR检测体系。利用原位RT-PCR对ASSVd在植株中的分布进行研究，结果表明苹果锈果类病毒RNA阳性信号主要位于苹果（金冠）和梨树（早酥梨）叶片的叶肉组织细胞核内。关键词：苹果；梨；类病毒；检测；序列分析IAbstractLowmolecularweightRNAswereextractedfrom40applesamplesand18pearsamples

7、,whichwerecollectedfrom223Farming&HerdingRegimentinHejingCounty,XinjiangUygurAutonomousRegion.ThenthesamplesweredetectedbyReturn-PAGEandRT-PCR.TheresultsshowedthatY1,Y6,Y8,Y10of'Goldendelicious'ofthe40applesampleswereinfectedwithApplescarskinviroid(ASSVd);Z3,Z7oftheearlype

8、arsofthe18pearsampleswereinfectedwithApplescarskinviroid(ASSVd);theinfectionoftheplacewas