虎桂药对有效组分配伍干预高尿酸血症及其肾保护作用机制研究

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1、广东药科大学硕士研究生学位论文分类号：___________密级：__________UDC：___________虎桂药对有效组分配伍干预高尿酸血症及其肾保护作用机制研究姓名：朱春霞学号：2111548027院系：中药学院学位类型：学术学位专业：中药学研究方向：中药及复方药理和毒理的研究导师：韩彬教授论文提交日期：2018年5月25日论文答辩日期：2018年5月23日学位授予单位：广东药科大学二〇一八年五月广东药科大学硕士研究生学位论文Themechanismstudyoneffectsofeffectivecomponetcompatibili

2、tyofPolyonumCuspidatumandRamulusCinnamomionhyperuricemiaandrenalprotectionCandidate：ZhuChunxiaStudentID：2111548027Affiliation：SchoolofTaditionalChineseMedicineAcademicDegreeAppliedfor：MasterofMedicineSpeciality：ScienceofChineseMateriaMedicaSupervisor：Prof.HanBinDayofDefence：Ma

3、y2018Degree-Conferring-Institution：GuangdongPharmaceuticalUniversityMay2018广东药科大学硕士研究生学位论文虎桂药对有效组分配伍干预高尿酸血症及其肾保护作用机制研究摘要目的：本研究拟基于分子生物学技术和代谢组学技术，探讨虎桂药对中的有效组分虎杖苷-桂皮醛配伍干预高尿酸血症及其肾保护作用的相关机制，以期为中药组分配伍干预高尿酸血症提供一定的参考。方法：60只SD雄性大鼠根据体重随机分为正常组、模型组、别嘌呤醇组、虎杖苷-桂皮醛（PC）低剂量组、PC中剂量组和PC高剂量组，每组10

4、只。通过皮下注射200mg/kg氧嗪酸钾，7h后灌胃50mg/kg次黄嘌呤和250mg/kg乙胺丁醇制备高尿酸血症大鼠模型，连续造模26天（1次/d）。在第5天皮下注射后6h后，通过眼眶取血测定各组大鼠给药前的血清尿酸（SUA）水平。第6天起开始给予灌胃治疗药，持续给药21天（1次/d）。第25天把各组大鼠放进代谢笼，并收集24h尿液与24h粪便，第26天皮下注射6h后，通过腹主动脉取血后处死大鼠，并取肾脏备用。利用试剂盒测定大鼠血中SUA、血尿素氮（BUN）和肌酐（Cr）水平；采用酶联免疫吸附测定（ELISA）法测定大鼠尿液中肾损伤因子-1（KI

5、M-1）、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）和24h尿微量白蛋白（U-mALb）水平；制作大鼠肾脏病理切片观察肾损伤情况；qPCR法检测肾脏血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）和环氧化酶-2（COX-2）mRNA的表达水平；Westernblotting法检测肾脏AngⅡ和COX-2的蛋白表达水平；免疫组化法检测肾脏转化生长因子-β1（TGF-β1）和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的蛋白表达水平；利用核磁共振氢谱（1H-NMR）技术建立高尿酸血症大鼠血清、尿液和粪便的代谢指纹谱图；应用正交偏最小二乘法判别分析（OPLS-DA）研究各组大鼠之间的代谢

6、物谱图差异；利用变量重要性投影（VIP）与t检验筛选出与高尿酸血症相关的血清、尿液和粪便中具有显著差异的潜在生物标志物，并比较筛选出的生物标志物的含量变化。I广东药科大学硕士研究生学位论文结果：与正常组比较，各组大鼠给药前SUA水平显著上升（P＜0.01）。给药后，与模型组比较，PC中剂量组和PC高剂量组大鼠的SUA水平均显著下降（P＜0.01，P＜0.05）；PC中高剂量组大鼠的BUN水平显著下降（P＜0.01，P＜0.05）；PC各剂量组均能显著降低KIM-1、NGAL和24hU-mALb水平（P＜0.01，P＜0.05）；肾脏组织病理切片结果

7、表明：PC中剂量和PC高剂量组均能显著改善高尿酸血症大鼠的肾脏损伤（P＜0.01，P＜0.05），且PC中剂量组大鼠的肾脏损伤程度最小；PC中剂量组和PC高剂量组大鼠的肾脏COX-2mRNA表达水平均显著降低（P＜0.01，P＜0.05）；PC各剂量组均能显著降低肾脏AngⅡmRNA表达水平（P＜0.01，P＜0.05）；PC各剂量组均能显著降低肾脏AngⅡ和COX-2的蛋白表达水平（P＜0.01）；PC各剂量组均能显著降低肾脏TGF-β1和α-SMA的蛋白表达水平（P＜0.01），其中PC中剂量组大鼠肾脏TGF-β1和α-SMA的蛋白表达水平最低

8、。PC能分别使血清、尿液和粪便中12个，6个和5个与高尿酸血症相关的潜在生物标志物产生明显地回调（P＜0.05），从而对高