胚胎干细胞的冻存复苏及其自发分化培养时上皮间质转化过程的研究

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1、分类号R329。●__--_____。。。●-____●-__●●_______●●一UDC616密级公珏编号!Q2窆窆圣!Q!垒QQ窆@江蒜大擎论文题目学科专业作者姓名指导教师答辩日期硕士学位论文MASTER'SDISSERTATIoN分类号lU29密级公珏．编号1Q22221Q14QQ2硕士学位论文胚胎干细胞的冻存复苏及其自发分化培养时上皮间质转化过程的研究Studyofthecryopreservationandresuscitationofembryonicstemcellsandepithelial-·mesenchymaltransitionprocessofembryo

2、nicstemcellsculturedbyspontaneousdifferentiation作者姓名：．王晓慧指导教师：小组成员：申请学位：胡嘉波副教授许文荣教授钱晖教授孙晓春副教授硕士学科专业：临床检验诊断学论文提交日期：2013年4月日论文答辩日期：2013年6月7日学位授予单位：江苏大学学位授予日期：2013年6月答辩委员会主席：钱军主任医师评阅＼删学位论文版权使用授权书江苏大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆、中国学术期刊(光盘版)电子杂志社有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致

3、，允许论文被查阅和借阅，同时授权中国科学技术信息研究所将本论文编入《中国学位论文全文数据库》并向社会提供查询，授权中国学术期刊-C光盘版)电子杂志社将本论文编入《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》并向社会提供查询。论文的公布(包括刊登)授权江苏大学研究生处办理。本学位论文属于不保密口学位论文作者签名：互豇堑l伽C弓年石月侈日指导教师签名：西妇争举凶＼)年‘月哆日独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已注明引用的内容以外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文

4、中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：殳肠盟日期：∞哆年乡月／歹日江苏大学硕士学位论文摘要’研究目的：对人胚胎干细胞进行冻存和复苏，比较．80℃冻存法、常规液氮冻存法和玻璃化冻存法对人胚胎干细胞冷冻保存的效率，以及复苏后细胞生长与分化的状态，建立高效的冻存方法。通过观察和检测人胚胎干细胞在自发分化培养条件下的细胞分化情况，探讨人胚胎干细胞自发分化培养时的分化规律。研究方法：l、将人胚胎干细胞进行．80℃冻存法冻存、常规液氮冻存法冻存及玻璃化冻存法法冻存，并在其冻存5d和60d时复苏。2、对复苏的人胚胎干细胞进行碱性磷酸酶染色，RT-RCR分析复

5、苏人胚胎干细胞的Oct．4、nanog、E-cadherin和Vimentin基因的表达情况。．3、观察自发分化培养条件下的人胚胎干细胞化学染色特性，免疫荧光染色检测自发分化培养的人胚胎干细胞上皮细胞标志(E．cadherin、CD24)和间质干细胞标志(Vimentin、CD44)的表达情况。4、实时荧光定量PCR鉴定自发分化培养的人胚胎干细胞上皮细胞相关基因(E．cadherin、ZO．1)幂II间质干细胞相关基因(N．cadherin、Vimentin、Fibronectin)的表达情况。研究结果：1、不同冻存方法及冻存时间复苏后人胚胎干细胞川收率：．80。C冻存I胚胎干细胞的

6、冻存复苏及其自发分化培养时上皮间质转化过程的研究组、常规液氮冻存组、玻璃化冻存组在5d时的回收率分别为28．5％、28．3％和80％，组间比较．80℃组与常规液氮组差异无显著性意义(P>O．05)，其余组间比较差异有显著性意义(P

7、无显著性意义(P>0．05)，其余组间比较差异有显著性意义(P<0．01)。在60d．时复苏后存活率分别为O％、8．3％和66．7％，组间比较差异有显著性意义(P<0．01)。．80℃冻存法在冻存5d和60d差异有显著意义(P<0．05)，其余组在不同冻存时间比较差异无显著意义(P>0．05)。3、不同冻存方法及冻存时间复苏后人胚胎干细胞克隆分化程度：．80℃冻存组、常规液氮冻存组、玻璃化冻存组在5d和60d复苏后未分化率分别为有升高的趋势。4、不同冻存方