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1、第21卷4期中国病毒学21(4):328-3322006年7月VIROLOGICASINICAJuly2006*利用HSV1α-基因启动子构建真核表达载体phIE**寸韡,刘龙丁,张莹,罗杰,吴文娟,张雪梅,廖芸,李琦涵(中国医学科学院中国协和医科大学医学生物学研究所,云南昆明650118)ConstructionandApplicationofEukaryoticExpressionVectorphIEContainingHSVIα-genePromoterCUNWei,LIULong-ding,ZHANGYing,
2、LUOJie,WUWen-juan,ZHANGXue-mei,**LIAOYun,LIQi-han(InstituteofMedicalBiology,ChineseAcademyofMedicalSciencesandPekingUnionMedicalCollege,Kunming650118,China)Abstract:AneukaryoticexpressionvectorphIEcomposedofpcDNA3skeletonandtheherpessimplexvirusimmediateearlygen
3、epromoterwasconstructedtoprovideanewchoiceforectopicexpression.TheplasmidphIE-Us1wasconstructedbyinsertingtheus1cDNAdownstreamofthepromotertoanalyzethefunctionofICP22proteinveryearlyintheinfectionprocess.Furthermore,thegeneencodingthechloramphenicolacetyl-transf
4、erasewasinsertedintothemultiplecloningsiteoftheexpressionvectortoyieldthephIE-CAT.InfunctionalanalysisofviralproteinICP22andVp16,phIE-CATwasconfirmedtobecapableofevaluatingthemechanismofthegenomeofherpessimplexvirus1transcriptionalregulation.Keywords:Herpessimpl
5、exvirus;Immediateearlygene;Vector;Promoter摘要:以pcDNA3质粒为骨架,构建由1型单纯疱疹病毒(HerpessimplexvirusI,HSVI)立即早期基因启动子指导外源蛋白转录的phIE真核表达载体,该质粒为外源蛋白的表达提供了更为广泛的选择,通过插入us1编码序列,phIE-Us1被用于分析ICP22蛋白在病毒感染早期的功能;在多克隆位点插入氯霉素乙酰转移酶编码基因构建phIE-CAT检测载体,应用于检测HSVI病毒蛋白Vp16及ICP22的功能,明确显示该质粒对于研究
6、单纯疱疹病毒的基因转录调控具有重要的应用价值。关键词:单纯疱疹病毒,立即早期基因,载体,启动子中图分类号:Q786文献标识码:A文章编号:1003-5125(2006)04-0328-05随着病毒分子生物学研究的深入,利用各种病simplexvirusI,HSVI)的分子生物学研究中,亦注毒基因启动子构建真核表达载体的技术已日益广意到其α、β、γ基因上游序列具有转录启动子所表[1][3]泛。目前,已有多种含有病毒启动子的真核表达现的特性,尤其是α基因的启动子,能够分别指载体以商业化或研究用的形式问世。其中,具有人导五个
7、α基因编码蛋白ICP0、ICP4、ICP22、ICP27巨细胞病毒(CMV)和空泡病毒SV40基因启动子和ICP47的转录启动,这些启动子均具有典型的结的pcDNA系列及pSV系列真核表达载体最为实验构特点,包括Sp1结合基序、病毒蛋白Vp16的结[2][4~6]室常用。它们作为一类非特异性外源基因的表达合基序以及GABP结合基序等等。这些元件组载体,具有重要的应用意义。同时,许多工作在与成了较完整的启动子结构,并与CMV、SV40基因CMV和SV40同属DNA病毒的单纯疱疹病毒(Herpes启动子类似,因而亦具备了作
8、为一个真核表达载体收稿日期:2005-12-31,修回日期:2006-03-24*基金项目:国家自然科学基金资助项目(30370065,30570081)。作者简介:寸韡(1980-),男,云南省籍,博士,主要从事病毒免疫学研究。**通讯作者.Correspondingauther.Tel:0871-8335905,E-mail:
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