竹节参总皂苷对d-半乳糖致衰老大鼠的脑保护作用及机制研究

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1、分类号R96密级公开UDC硕士学位论文竹节参总皂苷对D-半乳糖致衰老大鼠的脑保护作用及机制研究学位申请人：狄国杰学科专业：药理学指导教师：袁丁教授二○一三年三月ADissertationSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofMedicineTheeffectsandmechanismsoftotalsaponinsfromPanaxjaponicusC.A.MeyonthebrainaginginducedbyD-galact

2、oseinratsGraduateStudent:DiGuojieMajor:PharmacologySupervisor:Prof.YuanDingChinaThreeGorgesUniversityYichang,443002,P.R.ChinaMarch,2013三峡大学硕士学位论文三峡大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果，除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体均已在文

3、中以明确方式标明，本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。学位论文作者签名：日期：三峡大学研究生知识产权承诺书本人承认：我作为三峡大学硕士研究生在校学习期间，在导师指导下，依据研究工作所作学位论文的知识产权全部权归三峡大学所有。本人承诺：我有义务维护三峡大学的知识产权，凡是以我本人学位论文内的全部或部分研究成果，或实验数据为基础所形成的研究论文及成果，无论是以何种形式刊发学术论文、进行成果鉴定或申报奖励，均以三峡大学为第一作者单位或完成单位，并事先征得导师或学校相关部门的同意。我愿承担因违背上述承诺而引起的一切法津和经济

4、后果。学位论文作者签名：日期：I三峡大学硕士学位论文内容摘要目的：通过皮下注射D-半乳糖（D-gal）建立大鼠衰老模型，研究竹节参总皂苷对衰老大鼠的脑保护作用，并对其作用机制进行初步探讨。方法：将Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型组、竹节参总皂苷低、中、高剂量组和维生素E阳性对照组，采用D-半乳糖致衰老大鼠模型。模型组及给药组皮下注射D-半乳糖400mg/kg，正常组皮下注射生理盐水；同时，正常组和模型组灌胃给予生理盐水，竹节参总皂苷低、中、高剂量组分别灌胃给予50mg/kg、100mg/kg、200mg/kg的竹节

5、参总皂苷，阳性对照组灌胃给予200mg/kg的维生素E；每天1次，连续给药8周后进行实验。第7周开始运用Morris水迷宫方法检测大鼠的学习记忆能力。第8周，采取大鼠血和脑组织用于各项指标的检测：称取脑重量后进行脑重量指数的检测；脑组织匀浆后进行超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）活性的检测、总抗氧化能力（T-AOC）的检测、丙二醛（MDA）含量的检测；运用ELISA方法检测脑组织中脂褐素的含量；取海马组织经HE染色观察病理形态学变化及电镜下观察超微结构变化；运用免疫组化方法进行脑组织中Nrf2的表

6、达分析；运用Western-blot方法进行细胞核内Nrf2蛋白和脑组织中Bcl2、Bax蛋白的表达分析；运用Real-timePCR方法进行血红素氧合酶（HO-1）、醌氧化还原酶（NQO1）和谷氨酸半胱氨酸连接酶（GCLC）mRNA的表达分析。结果：1、学习记忆能力检测结果：与模型组相比，竹节参总皂苷各用药组大鼠学习记忆能力增强，表现为缩短逃避潜伏期、延长目的象限停留时间和增加经过平台的次数（P<0.05，P<0.01）。2、脑重量指数结果：与正常组相比，模型组大鼠脑重量指数明显降低（P<0.05）；与模型组相比，各用药

7、组大鼠脑重量指数明显升高（P<0.05，P<0.01）。3、氧化指标检测结果：与模型组相比，各用药组能明显降低脑组织中MDA含量，升高SOD、GSH-Px活性，增强T-AOC（P<0.05，P<0.01）。4、脂褐素含量检测：与正常组相比，模型组大鼠脑组织中脂褐素含量明显下降；与模型组相比，用药组脂褐素含量明显增加（P<0.05，P<0.01）。5、HE染色观察：正常组大鼠海马神经元排列规则，胞核清晰；模型组大鼠海马神经元排列散乱，细胞体积变小并大量变性，胞核固缩呈不规则形状；各用药组能够明显改善海马神经细胞形态，细胞核固

8、缩明显减轻，细胞排列较整齐。6、电镜观察海马超微结构：正常组大鼠海马线粒体数目较多且线粒体内嵴清晰；模型组线粒体数量减少且有空泡出现，有少量脂褐素沉积；用药组能改善线粒体的形态，增加线粒体数量。7、免疫组化染色结果：模型组胞浆Nrf2表达较正常组表达多，而胞核内Nrf2减少；用药组Nrf2在细胞核内的阳