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《弱酸性家蝇蛆抗菌肽md_7095_的分离纯化及性质研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、46卷3期微生物学报46(3):406~4112006年6月4日ActaMicrobiologicaSinica4June2006弱酸性家蝇蛆抗菌肽MD7095的分离纯化及性质研究12111*陆婕,汪俊汉,钟雅,赵燕英,陈正望(华中科技大学1生命科学与技术学院生物物理与生物化学研究所2附属医院武汉430074)摘要:家蝇抗菌肽多是碱性蛋白,目前尚无弱酸性家蝇抗菌肽的报道。通过稀醋酸低温浸提,海藻酸吸附,稀盐酸低温洗脱、盐析、SephadexG25凝胶过滤和CMC23弱阳离子交换柱层析等方法,利用灵敏的杀菌活性检测手段,
2、从家蝇蛆(Muscadomesticalarvae)中分离纯化出一组弱酸性抗菌肽,对苏云金芽孢杆菌(Bacillusthuringiensis)等革兰氏阳性菌和几种革兰氏阴性菌有强烈的杀灭作用,有极强的耐热、耐冻融的特性。通过电洗脱方法进一步纯化出抗菌肽MD7095,质谱测定其分子量7095Da,IEF电泳测得其等电点5159,经肽质量指纹谱(PMF)鉴定为一新肽。扫描电镜超微结构观察表明,弱酸性家蝇蛆抗菌肽对苏云金芽孢杆菌的杀菌机制主要是使细胞膜穿孔,内容物外泄,最终使细菌完全解体死亡。关键词:家蝇蛆;抗菌肽;抗菌活
3、性;细胞膜穿孔中图分类号:Q51413文献标识码:A文章编号:0001-6209(2006)03-0406-06[2~4]抗生素在现代医学发展史上起到了很重要的作肽Diptericin等抗菌蛋白,但未对家蝇(Musca用,但随着抗生素的广泛和长期使用,以及日益严重domestica)抗菌肽进行研究;家蝇属昆虫纲,双翅目,的抗生素滥用现实,造成细菌发生突变,产生耐药环裂亚目、蝇科,是我国大部分地区最常见、数量最性。传统的抗生素是通过抑制细菌的蛋白质或多的一种蝇类。家蝇中存在大量抗菌活性物质,对DNA的合成以及破坏细胞壁来
4、发挥作用,其过程需抗菌药物的开发具有重要的意义。但家蝇中抗菌肽要特殊受体,微生物很容易通过基因突变对药物产的种类较多,成分复杂,提取得率低,很难分离纯化,生抗性。抗菌肽作用机理不同于传统抗生素,一般国内学者的研究多停留在免疫血淋巴的阶段,已报[5~9]是通过物理作用造成细胞膜的穿孔,不需要特殊的道的家蝇抗菌肽均为碱性蛋白。受体,不会导致抗药菌株的产生,因此极有希望开发本文探索并建立了一种高灵敏度的/微量液体成为一类新型多肽抗生素。寻找新的抗菌肽已成为检测法0检测抗菌肽的杀菌活性,以野生家蝇蛆为生命科学领域中的热门研究课
5、题。原料,研究了家蝇抗菌肽的抗菌谱、分子量范围、等昆虫抗菌肽是昆虫体液免疫的重要成分,具有电点范围等理化性质及抗菌作用机制,并纯化出新[1]分子量小、对热稳定、广谱抗菌等特点。Boman等的弱酸性家蝇抗菌肽MD7095。首先从惜古比天蚕(Hyalopheracecropia)的滞育蛹中1材料和方法分离出第一个昆虫抗菌肽Cecropin,之后人们陆续从家蚕、柞蚕、蚊虫等昆虫体内分离出700多种抗菌111材料肽。家蝇蛆生活在杂菌横生的环境中,周身携带很11111供试蝇蛆:家蝇干蝇蛆(Muscadomestica多病菌而自身
6、却无感染,这种适应恶劣环境的能力larvae)即市售中药/五谷虫0,购于湖北省华城医药预示着它们在免疫防御方面有着独特机制。从家蝇有限公司。收集野生家蝇蛆,清洗后晒干,经黄沙焙蛆中分离抗菌活性物质,对抗菌药物的开发是一种炒干燥后,过筛除沙,得到家蝇干蝇蛆。新的有效途径。80年代国外学者已从棕尾别麻蝇11112菌株:苏云金芽胞杆菌(Bacillus(Sarcophagaperegrina)和绿蝇(Phormiaterranovae)体thuringiensis),华中农业大学生命科学与技术学院微内分离到了麻蝇素Sarco
7、toxinÑ、Ò、Ó和绿蝇双翅生物实验室提供;野生型金黄色葡萄球菌基金项目:国家自然科学基金(30370647);国家/863计划0(2002AA214061)*通迅作者。TelPFax:86-27-87792027;E-mail:zwchen21@hotmail.com作者简介:陆婕(1973-),女,安徽人,讲师,博士,主要从事生物活性肽的分离纯化和性质研究。E-mail:lujie.jane@1631com其他作者:柳林1收稿日期:2005-08-29;接受日期:2005-12-01;修回日期:2005-12-1
8、2陆婕等:弱酸性家蝇蛆抗菌肽MD7095的分离纯化及性质研究.P微生物学报(2006)46(3)407(Staphylococcusaureus)、大肠杆菌(Escherichiacoli)、分溶于15mL0101molPLNH4HCO3,用012molPL氨水枯草杆菌(Bacillussubtilis)、酿酒酵母(Sacchar
