磷酸肌酸钠对窒息缺氧幼鼠肾组织hif-1a和vegf表达的影响

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1、AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityForthedegreeofMasterEffectsofCreatinePhosphateSodiumonExpressionsofHIF—laandVEGFinRenalTissueofAsphyxiaAnoxiaYoungRatsByYuemeiLiuSupervisor：Prof．YingChenDepartmentofPaediatricsTheSecondClinicalCollegeofZhengzhouUniversityApril2013

2、原创性声明郑重声明：本人所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下独立进行研究、撰写完成的。除文中已经注明引用的内容外，i本论文不包含任何其他个人和集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确的方式表明。本声明的法律贵任有本人承担。学位论文使用授权说明学位论文作者：到d松日期：触膨年6月6日本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定I同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论窿被查阅和借阅；本人授权郑州大

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4、生不同程度的损害，发生率可高达82％【l圳。又因新生儿肾组织结构及功能发育尚不成熟，对内环境稳态的调节范围狭窄【3】，因此，极易受到窒息缺氧所导致的原发性损伤和再灌注损伤。新生儿窒息肾功能损害的观察与研究，已经引起国内外很多学者和临床医师的广泛关注，但至今仍缺乏分子水平深入探索。缺氧诱导因子．1(Hypoxiainduciblefactor．1，HIF．1)是介导细胞缺氧适应的关键性转录调控因子，其a亚基(HIF．10t)受到缺氧信号的影响，可以通过调控下游一系列靶基因的表达，参与缺氧细胞的能量代谢和氧利用障碍的发生机制，具有许

5、多重要的生物学效应。VEGF(Vascularendothelialgrowthfactor，VEGF)是调节血管发生的基本因子，又是HIF．1a下游重要的靶基因之一，肾脏的毛细血管网非常丰富，其缺氧缺血性疾病常伴随有微血管损害，因此，推测VEGF在肾脏缺氧性疾病中可能发挥着重要作用。这些都有待我们进一步研究。磷酸肌酸是人体内自有的活性物质，于1927年由EggletonP等【4J发现，是参与细胞能量代谢的重要物质之一，其主要的功能是即可作为高耗能细胞ATP浓度恒定的“缓冲剂”，又可作为细胞内的能量载体。磷酸肌酸钠(Creati

6、ne摘要PhosphateSodium，PCr)是目前常用的人工合成的高效低毒的心肌保护药，已广泛应用于心脏多种疾病的治疗中且有较好疗效。而肾脏也是对缺氧缺血最敏感的器官之一，其对肾脏的缺氧缺血性疾病是否有保护作用很少有文献报道，本实验通过观察PCr对窒息缺氧幼鼠肾组织形态结构的变化及对HIF．1a和VEGF表达的影响，探讨缺氧对肾脏的影响及PCr对肾脏缺氧性损伤的保护作用，为肾脏的缺氧性疾病的临床用药提供实验室依据。材料和方法1实验动物和分组3—4周龄的健康SD幼鼠24只，体重70．859，雌雄不限，随机分为三组：即窒息缺氧+

7、生理盐水组(模型组)、窒息缺氧+磷酸肌酸钠组(PCr组)和正常对照组(正常组)，每组8只。其中模型组和PCr组制作为窒息缺氧模型，正常组不作窒息缺氧处理。2药物应用PCr组在制作窒息缺氧模型前0．5h、窒息缺氧后即刻腹腔注射1．4m∥g的磷酸肌酸钠，模型组在相同的时间点腹腔内注射等量的生理盐水，正常对照组不作任何药物处理。3标本采集及处理分别于窒息缺氧后6h取各组幼鼠8只，称重后采用腹腔注射麻醉，切取一侧肾脏，将肾脏沿长轴纵向剖为两半，一半固定于4％中性甲醛溶液中，24d'时后脱水石蜡包埋，4℃冰箱保存，供病理切片和免疫组织化学

8、染色(SP)备用。剩余肾组织于液态氮中冷冻l小时后，再置于．80。C冰箱内保存备用，采用反转录聚合酶链式反应(reversetranscription-polymerasechainreactionanalyses，RT—PCR)检i贝tJHIF．1a和VEGF