黄连素联合索拉菲尼或奥沙利铂抗肝癌细胞作用的初步研究

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1、广东药科大学硕士研究生学位论文分类号：___________密级：________UDC___________黄连素联合索拉菲尼或奥沙利铂抗肝癌细胞作用的初步研究姓名：黄月朝学号：2111542012院系：临床医学院学位类型：学术学位专业：内科学专业研究方向：消化系病导师：陈垦论文提交日期：2018年3月28日论文答辩日期：2018年5月19日学位授予单位：广东药科大学二〇一八年五月广东药科大学硕士研究生学位论文PreliminaryStudyontheEffectofBerberineCombinedwithSorafeni

2、borOxaliplatinonHepatomaCellsCandidate:YuezhaoHuangStudentID:2111542012Affiliation:SchoolofClinicalMedicineAcademicDegreeApliedfor:MasterofMedicineSpeciality:InternalMedicineSupervisor:Prof.KenChenDayofDefence:May2018Degree-Conferring-Institution:GuangDongPharmaceut

3、icalUniversityMay2018广东药科大学硕士研究生学位论文广东药科大学学位论文原创性声明本人郑重声明：本人所呈交的学位论文，系我个人在导师的指导下进行研究工作所取得的成果。除文中已特别加以标注和致谢的地方外，不包含其它个人或机构已经发表或撰写过的研究成果。对本研究做出贡献的其它个人和集体，均已在文中明确说明和致谢。本人充分意识到本声明的法律结果完全由本人承担。学位论文作者签名：日期：2018年5月15日学位论文使用授权的声明本人完全了解广东药科大学有关保留和使用学位论文的规定，学校有权保留和向有关部门或机构送交本

4、论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。学校可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库，可以采用影印、缩印或其它复印手段保存和汇编本学位论文。保密论文在解密后适用本声明。论文作者签名：论文导师签名：日期：2018年5月15日广东药科大学硕士研究生学位论文黄连素联合索拉菲尼或奥沙利铂抗肝癌细胞作用的初步研究摘要目的：运用体外试验探讨黄连素（Berberine）分别联合索拉菲尼（Sorafenib）和奥沙利铂（Oxaliplatin）对肝癌细胞增殖与凋亡的影响，为临床应用提供基础理论。研究方法：(1)细胞：人肝癌细胞株SM

5、MC-7721,HepG2购自中国科学院上海生命科学研究所。(2)实验分组：设立空白对照组、不同浓度（5,25,50,100μM）Berberine组、不同浓度（1,2,4,8μM）Sorafenib组、不同浓度（1.5625,3.125,6.25,12.5,25,50μM）Oxaliplatin组；Berberine+Sorafenib组、Berberine单药组、Sorafenib单药组、空白对照组；Berberine+Oxaliplatin组、Berberine单药组、Oxaliplatin单药组、空白对照组。(3)MT

6、S比色法检测各干预组对SMMC-7721,HepG2人肝癌细胞的存活与生长情况的影响；结晶紫染色镜检各干预组对细胞形态、体积、密度的影响。(4)EdU细胞增殖法检测各干预组对处于S期的SMMC-772,HepG2细胞的影响。(5)集落形成实验检测各干预组对肝癌细胞增殖的影响。(6)蛋白质免疫印迹法检测各干预组诱导肝癌细胞凋亡相关蛋白表达的情况，其中有凋亡蛋白cleaved-caspase3及cleaved-PARP或者抗凋亡蛋白Bcl-2及肿瘤血管内皮生长因子VEGF的表达。(7)统计分析：统计数据使用I广东药科大学硕士研究生

7、学位论文GraphpadPrism6，均数±标准差的数据进行表示。多组之间的比较使用单因素方差分析法，P＜0.05则表示差异有统计学意义。结果：(1)MTS比色法结果显示：与对照组比，黄连素组、索拉菲尼组、奥沙利铂组细胞存活率下降，呈浓度依赖性；与各药物单独处理组比，黄连素与索拉菲尼组、黄连素与奥沙利铂组细胞存活率显著下降，呈时间依赖性，有统计学差异(P＜0.05)。结晶紫染色镜检结果也显示：镜下观察，对照组细胞体积大，性状不一，数量较多，细胞之间连接紧密；黄连素组、索拉菲尼组、奥沙利铂组细胞体积小，长梭形，细胞之间连接较稀疏

8、；黄连素与索拉菲尼组,黄连素与奥沙利铂组细胞体积最小，长梭形或者点状，密度最稀疏。(2)EdU细胞增殖法结果显示：与对照组比，黄连素组、索拉菲尼组、奥沙利铂组细胞增殖减少（蓝色荧光、红色荧光均减少）；而黄连素与索拉菲尼组和黄连素与奥沙利铂组细胞的增殖又较各自的单药组明显减少（